不同鈣通道在胞外鈣引起的成骨細(xì)胞增殖過(guò)程中的作用.pdf

1、成骨細(xì)胞起源于多功能的骨髓間質(zhì)的基質(zhì)細(xì)胞，是參與骨重建的重要功能細(xì)胞之一，能夠增殖分化，分泌骨質(zhì)，形成骨細(xì)胞。已有多篇文獻(xiàn)提出成骨細(xì)胞外鈣離子濃度([Ca2+]o)的升高可導(dǎo)致骨形成。([Ca2+]o)的內(nèi)流會(huì)刺激細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度([Ca2+]i)產(chǎn)生相應(yīng)的變化，成骨細(xì)胞增殖與([Ca2+]i)的變化有重要聯(lián)系。鈣離子的內(nèi)流是與膜上的通道蛋白密切相關(guān)，本文通過(guò)MTT比色法檢測(cè)不同鈣通道阻斷劑對(duì)成骨細(xì)胞的增殖的影響，通過(guò)單細(xì)胞鈣離子熒光成

2、像技術(shù)檢測(cè)在相同([Ca2+]o)刺激下不同鈣通道阻斷劑對(duì)成骨細(xì)胞([Ca2+]i)變化的影響，進(jìn)而探討參與此過(guò)程的鈣離子通道以及相應(yīng)機(jī)制。
　　 我們通過(guò)MTT比色法證明了成骨細(xì)胞在含有10mM/L Ca2+的培養(yǎng)基中細(xì)胞活力增加比率最高，同對(duì)照組相比，平均增殖率在20％。在加入鈣通道阻斷劑MTT實(shí)驗(yàn)中，同樣加入含有10mM/L Ca2+的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基含有100μm/L TMB-8和100μM/L U73122的成骨細(xì)胞樣本

3、同對(duì)照組相比，活力分別降低了14%和17.7%；我們?cè)?00nM/L、1μM/L、10μM/L濃度下重復(fù)Nifedipine和Verapamil的MTT增殖實(shí)驗(yàn)，同對(duì)照組相比，這些濃度下的Nifedipine和Verapamil對(duì)成骨細(xì)胞的增殖并沒(méi)有影響，但值得注意的是100μM/L濃度下的Verapamil可以抑制SOC活性，從而抑制成骨細(xì)胞增殖，測(cè)得活力降低16.2%。
　　 單細(xì)胞熒光測(cè)鈣實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：1、用10mM/L的

4、[Ca2+]o刺激成骨細(xì)胞，能夠引起[Ca2+]i的升高，且在加入刺激初始階段，[Ca2+]i會(huì)有一個(gè)明顯的快速上升階段，之后進(jìn)入持續(xù)升高階段；2、用100μM/L TMB-8和100μM/L U73122預(yù)處理過(guò)的成骨細(xì)胞，在受到10mM/L的[Ca2+]o刺激后，沒(méi)有明顯的快速上升階段，而之后的緩慢的持續(xù)升高階段同沒(méi)有TMB-8預(yù)處理的細(xì)胞現(xiàn)象相同；3、經(jīng)100nM/L、1μM/L、10μM/L Nifedipine預(yù)處理過(guò)的成骨細(xì)

5、胞，單細(xì)胞測(cè)鈣曲線與對(duì)照組曲線無(wú)明顯差異；4、經(jīng)100nM/L、1μM/L、10μM/L Verapamil預(yù)處理過(guò)的成骨細(xì)胞，測(cè)鈣曲線與對(duì)照組曲線五明顯差異，但經(jīng)100μM/L Verapamil預(yù)處理的成骨細(xì)胞，加入[Ca2+]o刺激后快速上升階段明顯被抑制，這與相應(yīng)的MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果相吻合。
　　 本文結(jié)論：1、細(xì)胞外高濃度的鈣可以促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖；2、SOC機(jī)制在細(xì)胞外鈣引起成骨細(xì)胞增殖的過(guò)程中起作用；3、電壓門控的鈣離子