骨折愈合過程中BDNF調(diào)控成骨細(xì)胞增殖和凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、BDNF是神經(jīng)生長因子家族重要成員，研究發(fā)現(xiàn)BDNF及其受體在骨痂中大量表達(dá)，神經(jīng)生長因子可能在骨折愈合過程中發(fā)揮重要作用，但其具體機(jī)制尚不明確。骨折延遲愈合、骨折不愈合是創(chuàng)傷骨科臨床常見難題，成骨細(xì)胞是骨折愈合過程中重要的修復(fù)細(xì)胞，研究BDNF對成骨細(xì)胞調(diào)控作用具有重要意義。
　　研究目的:
　　探求BDNF對成骨細(xì)胞增殖及凋亡的影響。
　　研究方法:
　　本研究首先在體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞，并利用RT-PCR檢測A

2、LP mRNA表達(dá)對成骨細(xì)胞進(jìn)行鑒定;使用MTT法檢測BDNF對成骨細(xì)胞增殖的影響;BDNF作用于成骨細(xì)胞，利用annexinⅤ-FITC/PI雙染檢測細(xì)胞凋亡，western blot檢測凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax的表達(dá)。
　　研究結(jié)果:
　　(1)細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定:從小鼠顱骨分離培養(yǎng)的成骨細(xì)胞生長旺盛，接種24小時大部分細(xì)胞已經(jīng)貼壁，原代細(xì)胞7天長滿瓶底，傳代后5天就能長滿瓶底，第三代成骨細(xì)胞仍有較高活性，RT-PCR

3、檢測到成骨細(xì)胞中ALP mRNA高表達(dá)，證實(shí)培養(yǎng)細(xì)胞為成骨細(xì)胞。
　　(2)MTT法發(fā)現(xiàn)25ng/ml BDNF處理成骨細(xì)胞未顯示明顯促增殖作用，50、100ng/ml BDNF明顯促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖。
　　(3)AnnexinⅤ-FITC/PI雙染結(jié)果顯示50、100ng/ml BDNF顯著抑制細(xì)胞凋亡，免疫印跡顯示BDNF促進(jìn)抑凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)，下調(diào)促凋亡蛋白Bax表達(dá)水平。
　　研究結(jié)論:
　　采用乳小