2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:研究對(duì)象為深圳市寶安區(qū)人民醫(yī)院2014年9~12月期間收治的登革熱病例。對(duì)2014年9~12月深圳市登革熱流行病毒株進(jìn)行血清型別鑒定,了解此次登革熱病原學(xué)的血清型情況;對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)分離獲得的登革病毒株E基因及全基因組序列,進(jìn)行同源性比較和進(jìn)化樹(shù)分析,從分子水平上探討2014年深圳登革病毒流行株的生物學(xué)特征,探討其可能的來(lái)源。
  方法:1.收集確診登革熱患者的病例資料,包括流行病學(xué)資料、臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查,其中登革熱病毒的血

2、清學(xué)和核酸檢測(cè)由深圳市疾控中心(CDC)完成。
  2.提取患者急性期血清標(biāo)本中登革病毒RNA,逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。經(jīng)通用引物及型特異性引物二輪PCR擴(kuò)增后,根據(jù)產(chǎn)物分子量大小確定登革病毒血清型。
  3.用BHK-21細(xì)胞培養(yǎng)分離6例1型登革病毒感染患者的急性期血清中的登革病毒。
  4.用Primer3.0及DNAMAN軟件設(shè)計(jì)2對(duì)1型登革病毒的E基因擴(kuò)增測(cè)序引物,RT-PCR擴(kuò)增6株深圳1型登革病毒全長(zhǎng)E基因,產(chǎn)物

3、經(jīng)測(cè)序、拼接后,進(jìn)行同源性與進(jìn)化樹(shù)分析。
  5.使用PCR DESIGN及DNAMAN軟件,設(shè)計(jì)11對(duì)PCR引物,RT-PCR擴(kuò)增2株1型登革病毒株全基因組序列,并對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行信息學(xué)分析。
  結(jié)果:1.共35例患者確診為登革熱病例,本地流行病例占80.0%,而輸入性病例僅占20.0%。
  2.21例患者經(jīng)RT-nPCR檢測(cè)陽(yáng)性,產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分析后,20例出現(xiàn)大小為482bp的登革病毒型特異性片段,判定系

4、登革1型病毒感染者,僅1例出現(xiàn)大小為119bp的登革2型病毒型特異性片段。前者本地感染及輸入性感染病例數(shù)分別為16例(80.0%)和4(20.0%),后者為輸入性病例。
  3.用BHK-21細(xì)胞培養(yǎng)分離PCR陽(yáng)性的6名登革1型病毒患者急性期血清標(biāo)本中的登革病毒株,6份標(biāo)本均出現(xiàn)細(xì)胞腫脹變圓、空泡結(jié)構(gòu)等細(xì)胞病變效應(yīng)。
  4.6株深圳1型登革病毒株感染患者經(jīng)E基因擴(kuò)增、測(cè)序,全長(zhǎng)均為1485bp,編碼495個(gè)氨基酸。6株深圳

5、登革1型病毒分離株同源性為100.0%,其同源性與深圳2010流行株接近,核苷酸和氨基酸同源性分別為99.5%、99.8%,與新加坡2009和日本2004流行株的核苷酸和氨基酸同源性最高達(dá)99.7%、100.0%。進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn),深圳6株登革1型病毒均屬于基因型Ⅰ型,與Shenzhen2010、Singpore2009、Japan2004的親緣關(guān)系較近,均在同一進(jìn)化支上。
  5.對(duì)從2例患者分離的DENV-1株進(jìn)行全基因組測(cè)序,結(jié)

6、果顯示2株深圳DENV-1同源性為100.0%。深圳登革1型病毒株全長(zhǎng)均為10735bp,編碼3329個(gè)氨基酸;全基因組序列進(jìn)化分析表明此病毒株為基因亞型Ⅰ毒株,與東南亞的病毒株同源性最高。與我國(guó)登革1型病毒基因亞型Ⅰ毒株GZ/80相比,深圳2014年登革1型病毒株發(fā)生了堿基變異430個(gè),氨基酸變異42個(gè),5'非編碼區(qū)(UTR)存在1處堿基差異,形成的二級(jí)結(jié)構(gòu)相同,均形成7個(gè)莖-環(huán)結(jié)構(gòu),3'UTR序列共有8處位點(diǎn)發(fā)生變異,前者形成了21

7、個(gè)莖-環(huán)結(jié)構(gòu),而后者形成了24個(gè)莖-環(huán)結(jié)構(gòu)。
  結(jié)論:1.2014年深圳以登革1型病毒流行為主,基因亞型屬Ⅰ型,且主要是本地流行;
  2.2014年流行于深圳市的登革1型病毒分離株,無(wú)論從E基因進(jìn)化樹(shù)還是全基因組序列進(jìn)化樹(shù)分析,均與新加坡、馬來(lái)西亞等東南亞分離株同源度最高,提示此次深圳流行的登革1型病毒可能來(lái)源于東南亞一帶;
  3.2014年6株深圳登革1型病毒分離株與2010年深圳登革1型病毒本地分離株比較發(fā)現(xiàn)

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