深圳市2007年流感流行特征及病毒分子變異研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  了解深圳市2007年流感流行特征,探討流感病毒血凝素蛋白重鏈(HA1)區(qū)基因特性、抗原變異及其與流感流行的關系,為流感防治提供科學依據。
  材料與方法:
  收集深圳市2007年流感樣病例和流感樣病例暴發(fā)疫情資料,用EXECL和SAS8.0統(tǒng)計軟件對流感樣病例就診百分比進行時間趨勢、年齡分布情況統(tǒng)計分析,并設計流感監(jiān)測預警線和平均水平線。采集流感樣病例鼻咽拭子標本,同時接種狗腎傳代細胞和9~11日齡雞胚的

2、羊膜腔和尿囊腔進行流感病毒分離培養(yǎng),用紅細胞凝集及凝集抑制試驗實現病毒滴度及型別鑒定。采用隨機整群抽樣法于流感流行期前、后采集一般人群血清了解深圳人群的血清抗體水平。對所有分離病毒提取RNA,用RT-PCR擴增HA1區(qū)基因片段,產物純化后測序;用DNASTAR軟件、SIMMONIC軟件和MEGA3.1軟件進行核苷酸—氨基酸序列分析、同源性比較、基因進化樹構建等分子變異研究,并與WHO推薦北半球疫苗株和國家代表株進行比較,揭示流感病毒HA

3、1區(qū)基因變異、抗原性改變及其與流感流行的關系。
  結果:
  1.深圳市2007年流感流行特征2007年深圳市流感樣病例(influenza-like illness,簡稱ILI)就診百分比曲線呈單峰分布,流感活動高峰主要分布在4~7月,ILI就診百分比于第25周達到峰值11.22%,超過預警線值10.86%,較2005、2006年明顯提高,且持續(xù)時間長;ILI主要集中在0~14歲年齡組兒童,占流感樣病例總數的72.97%

4、;學校流感流行高峰較早出現;深圳流感監(jiān)測預警線具有一定的季節(jié)性和靈敏度,能及時發(fā)現異常值。2007年共報告流感樣病例暴發(fā)疫情50起,經實驗室PCR檢測,35起流感病毒陽性,其中A型29起,B型6起;時間上主要分布在3~6月,占92.0%,88.0%發(fā)生于中小學校。2007年共檢測流感樣病例鼻咽拭子標本2831份,343份陽性,分離率為12.12%;H1N1亞型、H3N2亞型、B型流感病毒所占構成比分別為3.5%、62.68%和33.82

5、%;其中1~6月份以H3N2亞型為主要流行株,7~12月份則以B(Yamagata)系為主要流行株。月病毒分離率1~6月份逐步升高,6月份最高為28.38%,后按月遞減,與ILI就診百分比時間變化趨勢一致。結合往年資料發(fā)現主要流行株交替出現。2007年3、9月份共采集一般人群血清1700份,H3N2亞型血清抗體陽性率最高,3、9月份分別為:65.82%和72.94%,經檢驗具統(tǒng)計學意義(P<0.05),這與2007年H3N2亞型病毒活動

6、水平較高有關;H1N1亞型、B(Victoria)系、B(Yamagata)系毒株3、9月份抗體陽性率分別為46.98%、43.80%、43.84%、21.90%、41.18%和21.67%;除H3N2亞型外,其它三個型別流感病毒幾何平均滴度偏低。
  2.深圳市2007年流感病毒血凝素蛋白重鏈區(qū)基因變異H3N2亞型流感病毒血凝素重鏈(HA1)區(qū)核苷酸同源性和基因進化樹結果均顯示:2007年H3N2亞型毒株分為兩個分支,1~4月份

7、部分毒株與國家代表株A/JXDH/312/2006(H3N2)在一個分支,該部分毒株占1~4月份H3N2亞型分離株的33.33%;5月份之后的毒株與2008~2009年疫苗株A/Brisbane/10/2007(H3N2)為同一分支,并在流行上占優(yōu)勢,該部分毒株占2007年H3N2亞型分離株的89.30%;2005~2006年毒株與2006~2007年度疫苗株A/Wisconsin/67/2005(H3N2)距離較近;A/Brisban

8、e/10/2007(H3N2)是從A/Wisconsin/67/2005(H3N2)進化而來的抗原變異株。氨基酸位點是隨著時間發(fā)展逐步變化。與參照株A/Wisconsin/67/2005(H3N2)比較發(fā)現,所有毒株發(fā)生D122N、1223V氨基酸替換,1~4月份部分毒株在抗原決定簇A區(qū)發(fā)生R142G和N144D氨基酸變異,該變異沒有被保留下來,5月份之后的毒株發(fā)生G50E、K140I氨基酸替換;D122N、N144D氨基酸置換分別導致

9、增加和丟失一個糖基化位點。
  受體結合位點氨基酸較保守。H1N1亞型流感病毒HA1區(qū)核苷酸同源性和基因進化樹結果一致。HA1區(qū)基因進化樹結果為2007年、2006年毒株和國家代表株A/GDLH/219/2006(H1N1)在一個分支,2005年毒株分為兩個分支,4月份之前分離株與A/NewCaledonia/20/1999(H1N1)為同一分支,5月份之后的分離株與A/SolomonIsland/3/2006(H1N1)為一支。

10、氨基酸序列分析顯示,2005年5月以后的大部分毒株出現以下氨基酸變異:T82K、Y94H、R146K、R209K和T267N,2006年5月份之后的毒株在抗原決定簇B區(qū)發(fā)生了A190T、H193Y和E195D氨基酸變異,同時也發(fā)生A區(qū)R146K的置換。所有毒株的糖基化和受體結合位點比較保守。
  2007年B型流感病毒HA1區(qū)基因進化樹分為B(Victoria)和B(Yamagata)兩個譜系,其中B(Victoria)系毒株與深

11、圳2006年分離株、本年度疫苗株B/Malaysia/2506/2006、國家代表株B/Shenzhen/155/2005同在一個分支;B(Yamagata)系毒株與國家代表株B/FJXL/54/2006距離最近,其次為2008~2009年度疫苗株B/Florida/4/2006。氨基酸位點分析顯示:B(Victoria)毒株發(fā)生S134P氨基酸變異,B(Yamagata)系毒株發(fā)生R48K、P108A、L131P和D197N氨基酸替換

12、;197-199糖基化位點變異頻率較高,76.66%的B(Yamagata)系毒株發(fā)生D197N氨基酸置換導致增加一個糖基化位點。
  結論:
  深圳市流感流行高峰在夏季;流感監(jiān)測預警線和平均水平線具有較好的季節(jié)性和靈敏度,能及時發(fā)現異常值。低年齡組人群較易受流感病毒感染,學校流感監(jiān)測值得重視。深圳每年主要流感流行株交替出現。2007年深圳市H3N2亞型流感病毒的基因特性和抗原性已發(fā)生變化,引起該型病毒較高水平的流行,流感

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