2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩59頁未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、骨形態(tài)發(fā)生蛋白(BMPs)由Urist發(fā)現(xiàn)并命名,被認(rèn)為是在肌肉等軟組織中誘導(dǎo)異位骨化的因子,隨后BMPs被證實(shí)也參與機(jī)體的多種器官組織的發(fā)育和形成,在機(jī)體中的多種細(xì)胞中發(fā)揮廣泛的生物作用。BMPs通過激活Smad依賴性通路和非Smad依賴性通路來影響基因表達(dá)。近年來關(guān)于不同物種、不同細(xì)胞、不同時(shí)間干預(yù)BMP信號(hào)通路的研究發(fā)現(xiàn)均可以導(dǎo)致骨量的不同變化,但具體機(jī)制尚不明了,且存在很大的爭(zhēng)議。目前的研究較多關(guān)注的是骨量的增多與減少,卻很少涉

2、及骨的質(zhì)量問題。
  骨發(fā)生蛋白1A型受體-BMPR1A(也叫做Alk-3、Brk-1)與BMPs和BMPRⅡ同屬于TGF-β(轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β)家族,BMPR1A是BMP2,BMP4的強(qiáng)有力的受體,直接影響B(tài)MP2,BMP4在通路中的作用。BMP2是骨誘導(dǎo)因子,可以誘導(dǎo)間充質(zhì)細(xì)胞增生、分化為成骨細(xì)胞或軟骨細(xì)胞,在骨的發(fā)生、誘導(dǎo)、修復(fù)等方面發(fā)揮關(guān)鍵作用。BMP2可直接或間接參與破骨細(xì)胞的形成、分化、成熟及活性;BMP4是一個(gè)關(guān)鍵的成

3、骨細(xì)胞因子,參與異位骨化的早期病變,對(duì)Ⅰ型膠原蛋白(COL1)、堿性磷酸酶(ALP)、骨鈣素(Ocn)的表達(dá)有刺激作用;BMP4可誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞分化形成軟骨細(xì)胞,并促進(jìn)軟骨細(xì)胞的成熟。
  成骨細(xì)胞由骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化而來,主要參與骨的形成和骨損傷的修復(fù)過程?;钴S的成骨細(xì)胞位于骨形成表面。分化成熟的成骨細(xì)胞合成并分泌胞外基質(zhì)蛋白,包括各種膠原和非膠原蛋白、形成類骨質(zhì)及啟動(dòng)骨的形成。成年機(jī)體的骨形成,受到嚴(yán)格的調(diào)控以維持骨的穩(wěn)態(tài)

4、。成骨細(xì)胞在骨形成過程中要經(jīng)歷成骨細(xì)胞增殖、細(xì)胞外基質(zhì)成熟、細(xì)胞外基質(zhì)礦化和成骨細(xì)胞凋亡幾個(gè)階段。很多因素可調(diào)節(jié)這幾個(gè)階段,從而最終調(diào)控骨形成。
  目的:
  鑒于成骨細(xì)胞數(shù)量及功能在骨穩(wěn)態(tài)維持中的重要作用,以及BMPR1A介導(dǎo)的BMP信號(hào)通路在骨發(fā)育和骨形成中的重要影響,在本實(shí)驗(yàn)中,我們擬觀察:1.觀察成骨細(xì)胞其可能的機(jī)制;2.觀測(cè)BMPR1A介導(dǎo)的BMP通路對(duì)成骨細(xì)胞終末分化的影響,小鼠骨礦化、膠原合成等能力的影響,是

5、否導(dǎo)致小鼠骨質(zhì)量的變化,并探討其中可能的作用機(jī)制。
  方法:
  第一部分:成骨細(xì)胞中敲除BMPR1A在調(diào)控成骨細(xì)胞數(shù)量中的作用
  1.建立成骨細(xì)胞特異性敲除BMPR1A小鼠模型,并觀察小鼠大體形態(tài),測(cè)量體重和下肢骨長(zhǎng)度;
  2.利用X線攝片、microCT掃描、H&E染色等觀察小鼠骨量變化及骨組織結(jié)構(gòu)變化;
  3.TRAP染色觀察破骨細(xì)胞數(shù)量及功能,BrdU免疫組織化學(xué)檢測(cè)成骨細(xì)胞增殖情況,TUN

6、EL法觀察成骨細(xì)胞和生長(zhǎng)板肥大層細(xì)胞凋亡情況,
  第二部分:成骨細(xì)胞中敲除BMPR1A對(duì)成骨細(xì)胞終末分化的調(diào)節(jié)作用
  1.對(duì)小鼠下肢骨標(biāo)本進(jìn)行半脫鈣處理,進(jìn)行Von Kossa礦化結(jié)節(jié)染色、Masson染色、天狼星紅染色-偏振光顯微鏡等觀察礦化情況及膠原含量的變化,
  2.利用免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)成骨細(xì)胞標(biāo)志物OSX、Runx2、成骨礦化抑制因子OPN、FGF23的表達(dá);
  3.測(cè)定血清中堿性磷酸酶及鈣、

7、磷含量,觀察小鼠鈣磷代謝是否正常;
  4.小鼠長(zhǎng)骨原代成骨細(xì)胞及骨細(xì)胞體外分離培養(yǎng),并進(jìn)行成骨誘導(dǎo),茜素紅染色觀察礦化水平,流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期變化。提取細(xì)胞總RNA,實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)骨形成與骨吸收相關(guān)基因BMPR1A、β-catenin、RANKL、OPG的表達(dá)。
  5.對(duì)小鼠下肢骨標(biāo)本,及牙齒組織標(biāo)本進(jìn)行處理后,掃描電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)及骨量變化。
  結(jié)果:
  一、成骨細(xì)胞中敲除BMPR1A小鼠的

8、松質(zhì)骨骨量增加明顯,主要由于成骨功能增強(qiáng),破骨功能減弱導(dǎo)致。
  1.通過對(duì)比3.2Cre與DMP1Cre的表達(dá)位置我們可以明確3.2Cre在成骨細(xì)胞中特異性表達(dá),成骨細(xì)胞中敲除BMPR1A動(dòng)物模型成立。
  2.成骨細(xì)胞中敲除BMPR1A(cKO)小鼠與對(duì)照組相比外觀形態(tài)上無明顯差異,但其體型稍小,未見明顯的發(fā)育遲緩征象,但cko小鼠體重減輕,且下肢骨長(zhǎng)度與對(duì)照小鼠對(duì)比有所縮短。
  3.BMPR1A敲除小鼠松質(zhì)骨骨

9、量增加明顯。小鼠下肢骨的X線檢測(cè)發(fā)現(xiàn),cKO小鼠長(zhǎng)骨干骺端的放射密度較對(duì)照小鼠明顯增高。microCT結(jié)果提示在橫截面上,小鼠脛骨從松質(zhì)骨至皮質(zhì)骨cKO小鼠骨量均明顯增加,而脛骨組織切片的HE染色可見,cKO小鼠的松質(zhì)骨骨量明顯增多,這與正常的長(zhǎng)骨結(jié)構(gòu)差異顯著。
  4.cKO小鼠成骨細(xì)胞增殖及活性顯著增加。其成骨細(xì)胞標(biāo)志RunX2、Osterix表達(dá)升高,BrdU檢測(cè)成骨細(xì)胞增殖活動(dòng)加強(qiáng),TUNEL凋亡檢測(cè)成骨細(xì)胞凋亡減弱,

10、r>  5.cKO小鼠破骨細(xì)胞活動(dòng)減弱。cKO小鼠的骨組織中破骨細(xì)胞的數(shù)量減少,破骨細(xì)胞標(biāo)志RANKL表達(dá)水平減弱,體外分離培養(yǎng)骨細(xì)胞中RANKL/OPG基因表達(dá)比值有所降低。
  二、成骨細(xì)胞中敲除BMPR1A小鼠成骨細(xì)胞終末分化受阻。
  1.在體與離體礦化染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示cKO小鼠骨組織礦化能力減弱,掃描電鏡結(jié)果提示cKO小鼠的骨細(xì)胞之間失去了正常細(xì)胞間的連接突觸,無細(xì)胞與細(xì)胞間的緊密聯(lián)系,骨皮質(zhì)變薄,且孔隙增多,失去

11、了相互之間致密的連接。
  2.BMPR1A敲除小鼠骨膠原合成能力減弱,Masson染色發(fā)現(xiàn)cKO小鼠長(zhǎng)骨的膠原成分含量與對(duì)照小鼠相比減弱明顯,從膠原成分分析,cKO小鼠長(zhǎng)骨中所含膠原大多為Ⅲ型膠原,Ⅰ型膠原含量很少,而對(duì)照組小鼠則是Ⅰ型膠原為主,Ⅲ型膠原較少;從膠原的排列上來看,cKO小鼠的膠原排列與對(duì)照組相比顯得雜亂無章,失去了正常的縱向規(guī)律的排列。
  3.免疫組織化學(xué)染色結(jié)果提示cKO小鼠骨組織中骨礦化抑制因子OPN

12、和FGF23的表達(dá)增強(qiáng),血清中鈣水平與對(duì)照小鼠相比升高,而磷水平相對(duì)下降,cKO小鼠成骨細(xì)胞在細(xì)胞周期檢測(cè)中,有更多的細(xì)胞停留在了G期。
  結(jié)論:
  一、成骨細(xì)胞中敲除BMPR1A后,小鼠的成骨細(xì)胞數(shù)量明顯增加,破骨細(xì)胞數(shù)量微量減少,小鼠骨量增加明顯。成骨細(xì)胞中BMPR1A信號(hào)通路對(duì)維持正常骨量有重要調(diào)控作用,可以通過調(diào)控成骨細(xì)胞數(shù)量以實(shí)現(xiàn)。
  二、成骨細(xì)胞中敲除BMPR1A后,小鼠的成骨細(xì)胞終末分化受阻,會(huì)導(dǎo)致

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論