脈沖電磁場對成骨細胞作用的研究.pdf

1、目的：
　　 一、研究脈沖電磁場（puslsed electromagnetic fields，PEMFs）對成骨細胞(Osteoblast，OB)的作用，探究PEMFs治療骨質(zhì)疏松的的作用機理。
　　 二、研究PEMFs對造血干細胞龕中的主要組成成分——ALCAM+Sca-1-成骨細胞的作用，探究PEMFs對造血干細胞歸巢的作用。
　　 方法：
　　 一、取新生SD大鼠頭蓋骨，通過骨組織塊培養(yǎng)法分離、培

2、養(yǎng)成骨細胞。取傳代第三代細胞分為5組：1-70組、2-70組、3-70組、4-70組、對照組，其中前4組為作用組，分別接受1mT，70Hz;2mT，70Hz;3mT，70Hz;4mT，70Hz的PEMFs作用，對照組不接受PEMFs作用，同PEMFs組一致置于相同環(huán)境下、磁場作用距離外。按照分組劑量進行離體PEMFs作用(0.5h/d，連續(xù)作用4d)，作用結(jié)束后，對各組分別進行細胞堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，A

3、LP）活性、核結(jié)合因子α1(core-binding factoral，cbfal/RUNX2)表達、體外成骨能力指標——礦化結(jié)節(jié)(mineralized nodules)形成能力檢測。
　　 二、24只C57/6小鼠隨機分為兩組：PEMF組和對照組，每組12只小鼠。PEMF組小鼠接受PEMFs作用，劑量為2mT，70Hz，1h/次，1次/d，對照組不接受PEMFs作用，同PEMFs組一致置于相同環(huán)境下、磁場作用距離外，1h/次

4、，1次/d。連續(xù)作用4w。作用結(jié)束后，兩組分別取股骨、脛骨，沖出骨髓(bone marrow，BM)后，研磨至碎片，經(jīng)膠原酶消化，收集細胞經(jīng)淋巴細胞分離液分離，磁珠系統(tǒng)分選出CD31-CD45-TER119-細胞，再經(jīng)流式細胞儀分選ALCAM+Sca-1-成骨細胞。分選出的ALCAM+Sca-1-成骨細胞經(jīng)TRIzol法提取Total RNA，逆轉(zhuǎn)錄，基因芯片雜交，洗脫，檢測，進行數(shù)據(jù)分析。
　　 結(jié)果：
　　 一、經(jīng)P

5、EMFs作用后，與對照組相比，成骨細胞ALP活性降低，cbfal表達增多，礦化結(jié)節(jié)數(shù)量顯著增多。
　　 二、經(jīng)PEMFs作用后，PEMF組與對照組相比，ALCAM+Sca-1-成骨細胞的基因上調(diào)表達成骨細胞功能相關(guān)基因，與造血干細胞歸巢相關(guān)的細胞粘附分子、趨化分子基因，調(diào)節(jié)造血干細胞的細胞因子基因。
　　 結(jié)論：
　　 一、PEMFs作用成骨細胞可促進成骨細胞功能分化，增強成骨細胞的細胞外基質(zhì)礦化。