大鼠P2X4受體側(cè)窗區(qū)氨基酸殘基對受體功能的作用.pdf

1、胞外ATP(Adenosine Triphosphate)激動的P2X受體蛋白家族是配體門控離子通道，能非選擇性地通透多種陽離子。ATP與P2X受體蛋白結(jié)合后激活P2X受體蛋白并使該通道發(fā)生由關(guān)閉狀態(tài)到開放狀態(tài)的構(gòu)象轉(zhuǎn)變。已有的晶體結(jié)構(gòu)研究表明P2X受體蛋白上的ATP結(jié)合位點(diǎn)與其跨膜區(qū)孔道是由結(jié)構(gòu)上相對保守的三個連接區(qū)連接的，而這些連接區(qū)又構(gòu)成了允許離子進(jìn)入離子通道孔道的側(cè)窗區(qū)。連接區(qū)傳遞由ATP結(jié)合后引起的直至跨膜區(qū)孔道一系列構(gòu)象變化

2、信息的作用還不是十分清楚。
　　本實(shí)驗(yàn)中我們利用P2X4受體作為研究對象，采用丙氨酸、絲氨酸定點(diǎn)突變的方法研究連接區(qū)氨基酸殘基的側(cè)鏈結(jié)構(gòu)對離子通道門控作用的影響。實(shí)驗(yàn)表明Y54A/S，F(xiàn)198A/S，和W259A/S這些突變受體轉(zhuǎn)染后均能在HEK293細(xì)胞上正常表達(dá)，但是這些突變受體在ATP刺激下幾乎不能應(yīng)答。其中F198A/S突變受體的功能能被P2X4離子通道特別的陽性調(diào)節(jié)劑伊維菌素(IVM)部分恢復(fù)。Y195A/S，F(xiàn)200A

3、/S和F330A/S這些突變受體都顯示了與P2X4野生型受體相似的正常功能，說明這三個氨基酸殘基均沒有影響ATP的激動能力。然而Y195A/S，F(xiàn)200A/S和F330A/S這些突變受體均明顯地改變了對IVM調(diào)節(jié)受體失活時間效應(yīng)的敏感度，說明這三個氨基酸殘基可能參與了受體離子通道門控作用的調(diào)節(jié)?？傊覀兊难芯繑?shù)據(jù)顯示離子通道胞外區(qū)與跨膜區(qū)之間的連接區(qū)保守的氨基酸殘基參與了P2X受體構(gòu)象轉(zhuǎn)變過程中的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程與離子通道門控作用。