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文檔簡介
1、目的:
探究小膠質(zhì)細胞P2X4受體對慢性功能性內(nèi)臟痛脊髓中樞敏化作用,為慢性內(nèi)臟痛的藥物治療提供新的作用靶點和治療方向。
方法:
新生SD大鼠出生第3~21天,每天固定時間給予3小時母嬰分離,建立腸易激綜合征(IBS)慢內(nèi)臟痛大鼠模型。通過檢測大鼠腹外斜肌對結(jié)直腸擴張的放電反應(yīng)來評估IBS模型建立是否成功,并記錄大鼠腹外斜肌在鞘內(nèi)給予P2X4受體阻斷劑5-BDBD、激動劑C5-TDS前后對于結(jié)直腸擴張的放電
2、幅值;采用Western blot方法檢測大鼠脊髓P2X4受體以及腦神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)的表達情況;借助免疫組化的方法檢測大鼠脊髓背角離子鈣接頭蛋白1(Iba-1)表達情況來觀察小膠質(zhì)細胞的活化狀態(tài);通過免疫熒光雙標方法觀察大鼠脊髓背角P2X4受體與Iba-1蛋白表達部位是否一致來確認P2X4受體是否在小膠質(zhì)細胞上表達。
結(jié)果:
與正常大鼠相比較,IBS大鼠腹外斜肌對結(jié)直腸擴張刺激反應(yīng)顯著增強(p<0.05);鞘
3、內(nèi)給予P2X4受體阻斷劑5-BDBD可抑制IBS和正常大鼠腹外斜肌對結(jié)直腸擴張的放電反應(yīng),同等劑量下,其對IBS大鼠的阻斷反應(yīng)更明顯(p<0.05),而且在IBS大鼠該阻斷劑表現(xiàn)出明顯的劑量依賴效應(yīng);鞘內(nèi)給予P2X4激動劑C5-TDS后,IBS和正常大鼠腹外斜肌對結(jié)直腸擴張刺激放電反應(yīng)顯著增強,同等劑量下,對IBS大鼠的激動作用更明顯(p<0.05),而且在IBS大鼠該激動劑表現(xiàn)出明顯的劑量依賴效應(yīng);Western blot結(jié)果顯示,與
4、正常大鼠相比較,IBS大鼠脊髓胸腰段和腰骶段P2X4受體顯著表達(p<0.05)及 BDNF蛋白顯著表達(p<0.05);而且鞘內(nèi)給予P2X4受體阻斷劑后,BDNF在IBS大鼠脊髓表達的抑制程度顯著高于正常大鼠(p<0.05);免疫組化結(jié)果顯示,與正常大鼠相比較,IBS大鼠脊髓背角 Iba-1蛋白顯著表達(p<0.05),形態(tài)發(fā)生不同程度的肥大,而且鞘內(nèi)給予P2X4受體阻斷劑后,Iba-1在IBS大鼠脊髓背角的表達抑制程度顯著高于正常大
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