miR-206對牛骨骼肌衛(wèi)星細胞分化的影響研究.pdf

1、microRNA(miRNA)是真核生物中一類約22bp大小的的非編碼RNA小分子，通過與靶基因mRNA3'端非翻譯區(qū)特異性的結合而導致靶mRNA的降解或者抑制其翻譯，從而對基因表達進行轉(zhuǎn)錄后調(diào)控，是一類重要的調(diào)節(jié)因子。microRNA(miRNA)參與的生命過程包括早期發(fā)育、細胞增殖、細胞凋亡及細胞分化等。隨著越來越多microRNA的發(fā)現(xiàn)以及功能與調(diào)節(jié)通路的闡明，microRNA已經(jīng)成為當前生物學領域的研究熱點。研究表明，micro

2、RNA在肌肉發(fā)育過程中也發(fā)揮了重要的調(diào)控作用。在生物體內(nèi)microRNA的表達具有組織特異性，一些學者把在肌肉中特異表達的microRNA命名為MyomiRs家族，包括miR-1、miR-133a、miR-206等等。MyomiRs的大部分成員在心肌和骨骼肌中都有表達，但是只有miR-206為骨骼肌特異性表達，所以本實驗選擇骨骼肌特異性的miR-206為研究對象。
　　 本文以原代培養(yǎng)的牛骨骼肌衛(wèi)星細胞為實驗材料，通過Real

3、Time PCR檢測正常培養(yǎng)的牛骨骼肌衛(wèi)星細胞在分化不同時期miR-206的表達量。同時通過轉(zhuǎn)染miR-206的真核表達載體研究miR-206對牛骨骼肌衛(wèi)星細胞分化的影響，結果表明:
　　 使用膠原酶XI與胰蛋白酶相結合的方法，經(jīng)過差速貼壁成功分離了原代牛骨骼肌衛(wèi)星細胞。細胞生長狀態(tài)良好，在含有2％馬血清的培養(yǎng)基誘導下，細胞能夠分化并融合形成多核的肌管;分化效率較高，免疫熒光染色顯示細胞內(nèi)骨骼肌標志性分子呈陽性表達。
　　

4、 實時熒光定量PCR技術驗證miR-206在牛骨骼肌衛(wèi)星細胞分化不同時期呈現(xiàn)出差異表達的情況，在未分化細胞中表達量最低，隨著分化時間的延長其表達量逐漸上調(diào)，在第五天表達量為最高。通過轉(zhuǎn)染真核表達載體pcDNA3.1(+)-miR-206與對照組相比，過表達miR-206對牛骨骼肌衛(wèi)星細胞有促進分化的作用。C2C12細胞是體外分化的理想模型，同樣我們檢測其分化不同天數(shù)miR-206的表達情況，實驗結果顯示miR-206的表達水平也是在第