骨骼肌衛(wèi)星細胞的體外培養(yǎng)和心肌勻漿對衛(wèi)星細胞誘導(dǎo)分化的影響.pdf

1、目的: 骨骼肌衛(wèi)星細胞移植到受損心肌中后，在新的環(huán)境下可能受到環(huán)境誘導(dǎo)作用，可能與心肌細胞形成連接，表達心肌特異性蛋白，在新的環(huán)境下生物學(xué)性狀出現(xiàn)變化。由于體內(nèi)環(huán)境的復(fù)雜性和研究衛(wèi)星細胞在不受電機械刺激下的生長和分化情況，我們設(shè)計了體外心肌勻漿微環(huán)境下衛(wèi)星細胞的體外培養(yǎng)，來觀察衛(wèi)星細胞生物學(xué)性狀的變化。 方法: 應(yīng)用胰蛋白酶和膠原酶I消化法獲取骨骼肌衛(wèi)星細胞，以Percoll非連續(xù)密度梯度離心法純化衛(wèi)星細胞。以一抗α-肌動蛋白(

2、α-Actin)單克隆抗體，應(yīng)用SABC免疫組化染色法鑒定衛(wèi)星細胞。應(yīng)用原代培養(yǎng)的第3天加入心肌勻漿液持續(xù)作用1周，1周后轉(zhuǎn)換為完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)3周。觀察衛(wèi)星細胞形態(tài)變化和分化特性，3周后應(yīng)用免疫組化的方法檢測心肌特異性肌鈣蛋白-T(cTn-T)的表達。 結(jié)果: 本實驗方法可以獲取純度>90％的衛(wèi)星細胞，可以為細胞移植獲取大量純度高的種子細胞。衛(wèi)星細胞多呈梭形或者紡錘形，培養(yǎng)4至5天就可以看到細胞互相融合形成肌管。衛(wèi)星細胞抗a

3、-Actin染色，陽性細胞漿中有棕色顆粒。原代培養(yǎng)的衛(wèi)星細胞經(jīng)過誘導(dǎo)培養(yǎng)后表現(xiàn)出不適應(yīng)，早期、大量的死亡。28天后應(yīng)用SABC免疫組化的方法檢測，結(jié)果示衛(wèi)星細胞不表達心肌特異性cTn-T蛋白。 結(jié)論: 1.衛(wèi)星細胞在心肌勻漿微環(huán)境下表現(xiàn)出不適應(yīng)，早期大量、死亡。誘導(dǎo)培養(yǎng)后不表達心肌特異性cTnT蛋白2.骨骼肌衛(wèi)星細胞仍然是一種有前景的種子細胞，但是植入前需要經(jīng)過預(yù)處理或者轉(zhuǎn)染一些有用的目的基因，以增加移植細胞的生存率，增