神經(jīng)干細(xì)胞移植治療恢復(fù)期大鼠脊髓損傷的作用研究.pdf

1、目的：
　　 將體外培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞注入到恢復(fù)期脊髓損傷的大鼠體內(nèi),觀察恢復(fù)期脊髓損傷大鼠在注入外源性的神經(jīng)干細(xì)胞后肢體功能變化;脊髓損傷大鼠在注入外源性的神經(jīng)干細(xì)胞后,神經(jīng)干細(xì)胞在損傷部位的分布、是否分化及分化結(jié)果。
　　 材料與方法：
　　 1.從孕14天的SD大鼠(由鄭州大學(xué)動物實驗中心提供)體內(nèi)的胎鼠中,提取胎腦海馬組織,經(jīng)機(jī)械分離法分離提取細(xì)胞、37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,

2、得到純度相對較高的神經(jīng)干細(xì)胞;將120只SD大鼠(鄭州大學(xué)動物實驗中心)按改良Allen’s打擊法制作脊髓損傷模型,一周后存活90只,將這90只脊髓損傷大鼠進(jìn)行隨機(jī)分組,每組30只:(1)對照組:造模但是不進(jìn)行神經(jīng)干細(xì)胞移植;(2)局部移植組:造模后4W在脊髓損傷病灶局部進(jìn)行神經(jīng)干細(xì)胞移植;(3)靜脈移植組:造模后4W經(jīng)靜脈進(jìn)行神經(jīng)干細(xì)胞移植。
　　 2.分別于移植后的1,2,4,12,24周對隨機(jī)抽取的各組6只脊髓損傷動物后肢

3、的運動功能進(jìn)行BBB評分,評定脊髓損傷大鼠的后肢功能變化,并于移植后的1,2,4,12,24周各組隨機(jī)抽取6只脊髓損傷動物,分別做Brdu免疫組化染色、GFAP免疫組化染色、MAP-2免疫組化染色及ERK1/2免疫組化染色,觀察神經(jīng)干細(xì)胞在脊髓損傷大鼠損傷局部的分布、是否分化及分化結(jié)果。
　　 結(jié)果：
　　 1.三組脊髓損傷大鼠分別作不同處理后,發(fā)現(xiàn)三組脊髓損傷大鼠的BBB評分均有不同程度的增加,基本于第12周達(dá)最大值,

4、而12周以后無明顯變化,而且在4周以后靜脈移植組及局部移植組脊髓損傷大鼠的BBB評分明顯高于同期對照組大鼠的BBB評分,而靜脈移植組和局部移植組之間無明顯差別;
　　 2.在經(jīng)過靜脈或者局部神經(jīng)干細(xì)胞移植后,靜脈移植組及局部移植組病灶局部可見Brdu陽性細(xì)胞,靜脈移植組及局部移植組病灶局部GFAP、ERK1/2表達(dá)逐漸提高,在4周時達(dá)最大值,4周以后無明顯變化,移植4周后GFAP、ERR1/2表達(dá)較同期對照組減少;
　　

5、 3.靜脈移植組及局部移植組病灶局部MAP-2表達(dá)逐漸提高,在4周達(dá)最大值,而4周以后呈下降趨勢,12周后無明顯變化,但MAP-2表達(dá)卻較同期對照組增多。
　　 結(jié)論：
　　 1.無論靜脈途徑或局部種植,神經(jīng)干細(xì)胞移植后均可在病灶局部增殖分化為神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,從而促進(jìn)神經(jīng)功能的恢復(fù),兩種移植方式的作用沒有明顯區(qū)別;
　　 2.神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的再生不是線性增加,而是呈現(xiàn)出先增殖分化后抑制的態(tài)勢;這個神經(jīng)再生的過