類(lèi)胡蘿卜素產(chǎn)生菌的篩選及培養(yǎng)條件初步研究.pdf

1、從四川瀘州老窖酒廠的酒糟樣品中篩選出7株產(chǎn)黃色、橙色或橙黃色的細(xì)菌L-3-H-20、L-6-H-10、L-6-JX-3、L-3-JX-1、L-4-JX-4、L5-H-10、L-6-JX-1。經(jīng)過(guò)多次傳代培養(yǎng)后，復(fù)篩出一株生物量大，產(chǎn)色素能力強(qiáng)且穩(wěn)定性好的菌株L-3-H-20，將其重新命名為T(mén)H。 對(duì)菌株TH進(jìn)行掃描電鏡以及芽孢染色和革蘭氏染色觀察，發(fā)現(xiàn)該菌細(xì)胞呈微小的球狀，直徑在0.5～1.0μm之間，根據(jù)伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)(第

2、八版)的分類(lèi)方法將其初步歸屬為微球菌屬(Micrococcus sp．)，再根據(jù)手冊(cè)中的關(guān)于微球菌屬的生理生化特征描述進(jìn)行特征實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)證明該菌株的形態(tài)及生理生化特征符合伯杰氏細(xì)菌鑒定手船(第八版)中關(guān)于微球菌的描述。因此將菌株TH鑒定為微球菌(Micrococcus SP.)。 由于該菌TH是產(chǎn)胞內(nèi)色素，因此要提取色素就必須先對(duì)細(xì)胞進(jìn)行破碎。實(shí)驗(yàn)中比較了酸一熱破碎法、酶解法、超聲破碎法以及振蕩破碎法四種細(xì)胞破碎方法對(duì)該菌株

3、TH的細(xì)胞破碎情況，找到了該菌株TH的最佳細(xì)胞破碎方法——酸-熱破碎法。用該法破碎細(xì)胞后經(jīng)丙酮浸提，細(xì)胞殘片基本無(wú)色，且浸提液中的色素含量明顯優(yōu)于其他三種破碎方法所得的浸提液的色素含量。 實(shí)驗(yàn)中對(duì)TH所產(chǎn)色素進(jìn)行了分離和初步鑒定。通過(guò)可見(jiàn)紫外光譜實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該色素有三個(gè)吸收峰，分別在415nm，438nm和470nm處，而438nm是其最大吸收峰。查閱《食用色素的識(shí)別與應(yīng)用》手冊(cè)以及對(duì)比B-胡蘿卜素的標(biāo)準(zhǔn)光譜圖可以知道，該吸收光譜為

4、明顯的類(lèi)胡蘿卜素吸收光譜。此外，通過(guò)將薄層層析實(shí)驗(yàn)中得到的該色素的遷移值與《食用色素的識(shí)別與應(yīng)用》手冊(cè)中類(lèi)胡蘿卜素的遷移值進(jìn)行比對(duì)，把此種色素初步確定為綠黃質(zhì)。 發(fā)酵條件優(yōu)化實(shí)驗(yàn)表明，搖瓶裝液量、溫度、光照、碳源、搖瓶培養(yǎng)助劑是影響TH菌體生物量和色素產(chǎn)量的主要因素。而pH、L-Tyr對(duì)此菌株發(fā)酵結(jié)果影響很小。最終通過(guò)多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)得到了培養(yǎng)TH產(chǎn)類(lèi)胡蘿卜素的最佳條件：液體培養(yǎng)基中蛋白胨5g/L，牛肉膏5g/L，NaCl 5G/L，葡