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1、目的:應(yīng)用新生大鼠海馬神經(jīng)元體外原代培養(yǎng)的方法,探討錳致海馬神經(jīng)元的神經(jīng)毒性損害及?;撬岬母深A(yù)作用。 方法:取SPF級新生24小時內(nèi)的Wistar大鼠大腦海馬作神經(jīng)元原代培養(yǎng),培養(yǎng)至最佳狀態(tài),尼氏染色鑒定神經(jīng)細胞后,用于實驗。將培養(yǎng)細胞分組為:①空白對照組;②單獨染錳組,設(shè)計為低、中、高三個劑量組,錳添加終濃度分別為0.2mM、0.8mM和1.2mM,分別記為MI、M2、M3;③牛磺酸對照組,設(shè)計為低、中、高三個劑量組,?;撬崽?/p>
2、加劑量分別為5mM、10mM和20mM,分別記為TI、T2、T3;④?;撬岣深A(yù)組,錳及?;撬崽砑觿┝堪锤髯缘牡?、中、高濃度分別進行組合,細分為九個濃度組。各處理組在施加處理因素后24小時終止培養(yǎng),檢測以下指標:MTT比色試驗檢測神經(jīng)元OD值,LDH實驗檢測神經(jīng)元LDH活力,細胞凋亡-Hoechst染色觀察神經(jīng)細胞凋亡染色質(zhì)的形態(tài)學變化及半定量檢測凋亡率,F(xiàn)CM定量檢測細胞凋亡率,光鏡下觀察神經(jīng)細胞的形態(tài)學改變,透射電鏡觀察神經(jīng)細胞的超微
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