金魚雌核發(fā)育過(guò)程中胚胎蛋白質(zhì)組比較研究及肽質(zhì)譜指紋圖分析方法的優(yōu)化.pdf

1、　　為了進(jìn)一步研究在金魚雌核發(fā)育過(guò)程中不同發(fā)育階段的單倍體和二倍體蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異，并闡明單倍體不能正常發(fā)育的機(jī)制，本文以遺傳背景一致的金魚雌核發(fā)育單倍體(HE)和二倍體(DE)胚胎的相應(yīng)尾鰭出現(xiàn)期(為受精后31個(gè)小時(shí))的胚胎為材料，每隔2個(gè)小時(shí)為一個(gè)時(shí)期，共提取了3個(gè)時(shí)期的胚胎全蛋白質(zhì)進(jìn)行蛋白質(zhì)組分析。本論文對(duì)單倍體3個(gè)時(shí)期的胚胎全蛋白質(zhì)(分別為HE-1、HE-2、HE-3)采用雙向凝膠電泳進(jìn)行蛋白質(zhì)點(diǎn)的分離，獲得了重復(fù)性較好的凝

2、膠圖譜，采用PDQUEST2-D軟件分別對(duì)HE-1、HE-2、HE-3之間的差異蛋白進(jìn)質(zhì)進(jìn)行比較分析，經(jīng)MALDI-TOF和ESI-Q-TOF分析初步鑒定了28個(gè)差異蛋白質(zhì)點(diǎn)。通過(guò)對(duì)這些差異蛋白質(zhì)點(diǎn)的功能分析，發(fā)現(xiàn)3個(gè)與眼睛發(fā)育相關(guān)的蛋白質(zhì)：Gamma晶狀體蛋白質(zhì)M1-1、Gamma晶狀體蛋白質(zhì)M3、homeodomainprotein(cloneG6)；7與發(fā)育調(diào)控相關(guān)的差異蛋白質(zhì)，例如胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白質(zhì)2、Smad2、Met

3、hy1-CpG結(jié)合蛋白質(zhì)2；4個(gè)與神經(jīng)發(fā)育相關(guān)的蛋白質(zhì)，例如神經(jīng)生長(zhǎng)因子β鏈前體、Neuralplakophilin-relatedarm-repeatprotein。另外還鑒定了一些細(xì)胞分化與維持、體節(jié)形成、信號(hào)傳導(dǎo)等相關(guān)的蛋白質(zhì)。 　　據(jù)羅琛研究發(fā)現(xiàn)單倍體胚胎發(fā)育不正常是因?yàn)閱伪扼w不能選擇二倍體依賴的調(diào)控系統(tǒng)。本文研究發(fā)現(xiàn)在金魚雌核發(fā)育單倍體發(fā)育過(guò)程中，一些對(duì)發(fā)育起關(guān)鍵作用的蛋白質(zhì)在單倍體上表達(dá)下調(diào)的可能原因是編碼這些蛋白質(zhì)的基因

4、未能被選擇表達(dá)或表達(dá)受阻，從而導(dǎo)致單倍體胚胎發(fā)育過(guò)程中一些器官和形態(tài)發(fā)育不正常。另外一些蛋白質(zhì)表達(dá)上調(diào)可能表明了單倍體胚胎在尾鰭出現(xiàn)期一些組織、器官的形成。 　　肽質(zhì)譜指紋圖分析是一種常用的蛋白質(zhì)的鑒定方法.為了提高這種方法鑒定蛋白質(zhì)時(shí)序列覆蓋率和準(zhǔn)確度，本文以6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)為分析樣品，對(duì)幾種不同的酶解肽段的濃縮、脫鹽和點(diǎn)樣方法進(jìn)行了檢驗(yàn)和優(yōu)化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)將酶解肽段的濃縮體積控制在5μl以下和采用10mM檸檬酸銨緩沖液板上脫鹽能提高蛋白