雞艾美耳球蟲(chóng)核糖體小亞基序列分析.pdf

1、雞球蟲(chóng)病是一種由艾美耳球蟲(chóng)引起的危害極為嚴(yán)重的全球性寄生蟲(chóng)病，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，在中國(guó)更為嚴(yán)重。本實(shí)驗(yàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)室保存的4種18株艾美耳球蟲(chóng)孢子化卵囊的18SrDNA序列進(jìn)行克隆測(cè)序，其中15株進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育研究，另外3株柔嫩艾美耳球蟲(chóng)地克珠利、馬杜拉霉素和敏感株進(jìn)行抗藥性差異分析。 1.系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系研究 為了確定來(lái)自不同地區(qū)雞球蟲(chóng)種/株的親緣關(guān)系，研究其分類(lèi)學(xué)地位，本項(xiàng)研究對(duì)實(shí)驗(yàn)室收藏的堆型艾美耳球蟲(chóng)上海株(E.acerv

2、ulinaShanghaistrain，EASH)、堆型艾美耳球蟲(chóng)揚(yáng)大株(E.acervulinaYangdastrain，EAYD)、巨型艾美耳球蟲(chóng)上海株(E.maximaShanghaistrain，EMSH)、巨型艾美耳球蟲(chóng)Banksadde株(EmaximaBanksaddestrain，EMBA)、巨型艾美耳球蟲(chóng)Tysons株(E.maximaTysonsstrain，EMTY)、巨型艾美耳球蟲(chóng)Townsend株(E.maxi

3、maTownsendstrain，EMTO)、巨型艾美耳球蟲(chóng)連云港株(EmaximaLianyungangstrain，EMLY)、毒害艾美耳球蟲(chóng)上海株(E.necatrixShanghaistrain，ENSH)、柔嫩艾美耳球蟲(chóng)1A121株(Etenella1A121strain，ETAS)、柔嫩艾美耳球蟲(chóng)2KF株(Etenella2KFstrain，ETKF)、柔嫩艾美耳球蟲(chóng)2YM6株(Etenella2YM6strain，ETYM

4、)、柔嫩艾美耳球蟲(chóng)吳株(EtenellaWustrain，ETWU)、柔嫩艾美耳球蟲(chóng)北京株(EtenellaBeijingstrain，ETBJ)、柔嫩艾美耳球蟲(chóng)啟東株(E.tenellaQindongstrain，ETQD)和柔嫩艾美耳球蟲(chóng)WLR1株(EtenellaWLR1strain，ETWL)孢子化卵囊的18SrDNA基因進(jìn)行克隆、測(cè)序，并與從GenBank下載的雞球蟲(chóng)18SrDNA序列，使用軟件DNAstar5.0MegAli

5、gn進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析：4種艾美耳球蟲(chóng)同源性在94.6﹪～99.4﹪之間；7株E.tenella的同源性在99.0﹪～99.9﹪之間，5株Emaxima的同源性在96.9﹪～99.8﹪之間。測(cè)序所得的4種球蟲(chóng)和GenBank下載的4種球蟲(chóng)18SrDNA序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)顯示，這8種雞艾美耳球蟲(chóng)(另外4種球蟲(chóng)18SrDNA序列下載自GenBank)形成2個(gè)分支：Ⅰ，EASH、EMSH、Emivati、E.mitis、E.brunetti和

6、E.praecox；Ⅱ，ENSH和ETAS。Emaxima和Etenella各株的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)均根據(jù)地域關(guān)系產(chǎn)生2個(gè)分支。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明我國(guó)和美國(guó)雞球蟲(chóng)各種/株艾美耳球蟲(chóng)的分類(lèi)地位；同時(shí)也為艾美耳球蟲(chóng)分子遺傳學(xué)鑒定提供理論基礎(chǔ)。 2.抗藥性差異分析 為了研究抗球蟲(chóng)藥地克珠利和馬杜拉霉素對(duì)柔嫩艾美耳球蟲(chóng)18SrDNA的影響，分別對(duì)本實(shí)驗(yàn)室人工誘導(dǎo)的柔嫩艾美耳球蟲(chóng)地克珠利抗藥珠(Etenellaanti-diclazur

7、ilstrain，ETAD)、柔嫩艾美耳球蟲(chóng)馬杜拉霉素抗藥珠(Etenellaanti-maduramycinstrain，ETAM)和柔嫩艾美耳球蟲(chóng)藥物敏感株(E.tenelladrug-sensitivestrain，ETDS)孢子化卵囊的18SrDNA基因進(jìn)行克隆、測(cè)序，并通過(guò)生物信息軟件進(jìn)行對(duì)比差異分析。通過(guò)軟件DNAstar5.0MegAlign多序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)：ETAM株3個(gè)堿基發(fā)生突變，T170突變?yōu)镃，T646突變?yōu)镃，G