安徽三株柔嫩艾美耳球蟲(chóng)的耐藥性分析.pdf

1、 Anhui Agricultural University Thesis Study on the Drug resistance of Three E.tenella in Anhui province Granduate： Z h o u F e i y a Advisor Professor： Z e n g M i n g h u

2、 a Academic Degree Applied For： M a s t e r o f Ve t e r i n a r y M e d i c i n e Major： B a s i c Ve t e r i n a r y M e d i c i n e Research Direction： Veterinary Pharm

3、acology Institute： C o l l e g e o f A n i m a l S c i e n c e & Te c h n o l o g y MAY 2015 摘 要 雞球蟲(chóng)?。–occidiosis）是嚴(yán)重危害養(yǎng)雞業(yè)的一種腸道寄生蟲(chóng)病，其中致病性最強(qiáng)、危害最大的是柔嫩艾美耳球蟲(chóng)（E.tenella） 。為了檢測(cè)安徽省廬江縣、青陽(yáng)縣和肥西縣三個(gè)地區(qū)

4、E.tenella 的耐藥性情況， 分別采集廬江縣、 青陽(yáng)縣和肥西縣三個(gè)地區(qū)的養(yǎng)雞場(chǎng)球蟲(chóng)病患病雞的盲腸內(nèi)容物并培養(yǎng)， 通過(guò)分離單卵囊進(jìn)行分離純化， 根據(jù)卵囊的生物學(xué)特性和分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行純種 E.tenella 卵囊的鑒定， 為耐藥性的檢測(cè)奠定基礎(chǔ)。 本研究根據(jù)對(duì)廬江縣、青陽(yáng)縣和肥西縣三個(gè)地區(qū)進(jìn)行調(diào)查，最終選定三個(gè)地區(qū)均經(jīng)常使用的五種抗球蟲(chóng)藥物作為檢測(cè)藥物，即磺胺氯吡嗪鈉（Sulfachloropyrazine sodium） 、地克

5、珠利（Diclazuril） 、妥曲珠利（Toltrazuril） 、氨丙啉（Amprolium）以及氯羥吡啶（Clopidol） 。分別采用抗球蟲(chóng)指數(shù)（ACI） 、相對(duì)盲腸卵囊產(chǎn)量（ROP） 、病變記分減少率（RLS）和最適抗球蟲(chóng)活性百分率（POAA）四項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行綜合耐藥性判定；通過(guò)同工酶電泳分別獲得上海標(biāo)準(zhǔn)株、南京標(biāo)準(zhǔn)株、各藥物的耐藥蟲(chóng)株和三個(gè)地理株的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）乳酸脫氫酶（LDH） 、以及葡萄糖磷酸異構(gòu)酶（G

6、PI）的同工酶譜，通過(guò)比較酶譜間的差異進(jìn)行耐藥性分析；利用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性 DNA（RAPD）的方法擴(kuò)增上海標(biāo)準(zhǔn)株、南京標(biāo)準(zhǔn)株和三個(gè)地理株的基因，根據(jù)DNA 條帶的相似性與差異性觀察耐藥性的產(chǎn)生情況以及遺傳變異情況。 根據(jù)耐藥性的檢測(cè)結(jié)果，結(jié)合莫能霉素（Monensin） 、尼卡巴嗪（Nicarbazin）和球蟲(chóng)酯（乙氧酰胺苯甲酯） （Ethopabate）的作用機(jī)制與作用峰期的特點(diǎn)，采用莫能霉素+尼卡巴嗪+球蟲(chóng)酯配合用藥，以抗球蟲(chóng)指數(shù)、

7、相對(duì)盲腸卵囊產(chǎn)量、病變記分減少率和最適抗球蟲(chóng)活性百分率四項(xiàng)指標(biāo)綜合判定療效，篩選最佳的藥物濃度。 結(jié)果顯示：利用瓊脂小塊分離球蟲(chóng)單卵囊的技術(shù)簡(jiǎn)單可靠，成功率高，分離后的卵囊經(jīng)分子生物學(xué)技術(shù)和生物學(xué)特性鑒定均為純種 E.tenella，分別命名為廬江株、青陽(yáng)株和肥西株； 雞體試驗(yàn)法檢測(cè)可知廬江株球蟲(chóng)對(duì)妥曲珠利與氨丙啉敏感， 對(duì)氯羥吡啶中度耐藥， 對(duì)地克珠利與磺胺氯吡嗪鈉完全耐藥； 青陽(yáng)株球蟲(chóng)對(duì)地克珠利與妥曲珠利敏感，對(duì)磺胺氯吡嗪鈉與氯羥吡

8、啶完全耐藥，對(duì)氨丙啉中度耐藥；肥西株球蟲(chóng)對(duì)磺胺氯吡嗪鈉敏感，對(duì)地克珠利、氯羥吡啶和氨丙啉完全耐藥，對(duì)妥曲珠利中度耐藥；E.tenella 上海標(biāo)準(zhǔn)株與南京標(biāo)準(zhǔn)株的均只含有一條 LDH-2 酶帶，氨丙啉耐藥株有一條特征性的 LDH-3 酶帶，磺胺氯吡嗪鈉耐藥株與氯羥吡啶耐藥株有一條不同于標(biāo)準(zhǔn)株的 LDH-2 酶帶，地克珠利耐藥株和妥曲珠利耐藥株酶帶與標(biāo)準(zhǔn)株的酶譜一致，三個(gè)地理株與耐藥株有交叉條帶， 與雞體試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果相符； 磺胺氯吡嗪鈉耐