小麥組織培養(yǎng)體系優(yōu)化及抗凍基因KN2轉(zhuǎn)化小麥的研究.pdf

1、與水稻相比,小麥組織培養(yǎng)技術(shù)和再生體系還不十分完善,遺傳轉(zhuǎn)化效率低得多,研究小麥組織培養(yǎng)條件和植株再生頻率的影響因素,優(yōu)化小麥遺傳轉(zhuǎn)化體系對(duì)于有效開(kāi)展小麥轉(zhuǎn)基因育種有重要意義。近年來(lái)我國(guó)小麥凍害發(fā)生頻率不斷增加,危害程度日趨嚴(yán)重,利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)引進(jìn)外源抗(耐)凍基因是增強(qiáng)小麥的抗(耐)凍能力的可行途徑之一。
　　 本試驗(yàn)以隴春23、科農(nóng)199、Bobwhite等10個(gè)小麥品種為材料,研究了不同誘導(dǎo)培養(yǎng)基、分化培養(yǎng)基、繼代方式以及

2、基因槍轉(zhuǎn)化前的預(yù)培養(yǎng)等對(duì)小麥幼胚離體培養(yǎng)和轉(zhuǎn)化效率的影響；研究了接種方式、誘導(dǎo)培養(yǎng)基等對(duì)小麥成熟胚離體培養(yǎng)的影響。結(jié)果如下:誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加0.2mg/L的ABA、1.25 mg/L的CuSO4對(duì)胚性愈傷組織的形成和再分化有促進(jìn)作用,分化培養(yǎng)基中含5mg/L的KT、0.25 mg/L CuSO4再生效果較好,愈傷組織整塊繼代的方式有利于其胚性的維持,幼胚轉(zhuǎn)化前預(yù)培養(yǎng)4天而轉(zhuǎn)化后恢復(fù)培養(yǎng)15天轉(zhuǎn)化效率較高；半胚法接種方式及添加了CH、VB

3、1、Pro、Gln的誘導(dǎo)培養(yǎng)基有利于成熟胚的組織培養(yǎng)。
　　 在建立了小麥的高頻再生和高效遺傳轉(zhuǎn)化體系的基礎(chǔ)上,我們開(kāi)展了南極魚(yú)類的超氧化物歧化酶基因(KN2基因)轉(zhuǎn)化小麥的研究,期望獲得抗(耐)凍能力增強(qiáng)的小麥種質(zhì)。用pUBI∷Bar和pUBI∷KN2表達(dá)載體對(duì)小麥材料隴春23、科農(nóng)199和Bobwhite幼胚及其愈傷組織進(jìn)行了的基因槍法共轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化隴春23幼胚共得到耐Bialaphos的再生苗265株,CTAB法提取總DNA

4、進(jìn)行Bar基因和KN2基因的PCR檢測(cè),共檢測(cè)到轉(zhuǎn)Bar基因的樣品92個(gè),轉(zhuǎn)KN2基因的樣品98個(gè),轉(zhuǎn)Bar和KN2基因的樣品37個(gè),轉(zhuǎn)化率分別為14.91％、15.88％、和6.00％。轉(zhuǎn)化隴春23、科農(nóng)199和Bobwhite幼胚誘導(dǎo)10周左右的愈傷組織共得到耐Bialaphos的再生苗42株,CTAB法提取總DNA進(jìn)行Bar基因和KN2基因的PCR檢測(cè),共檢測(cè)到轉(zhuǎn)Bar基因的樣品17個(gè),轉(zhuǎn)KN2基因的樣品19個(gè),轉(zhuǎn)Bar和KN2基