版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、為了建立和優(yōu)化Alondra’s的高效再生及遺傳轉(zhuǎn)化體系,為小麥遺傳轉(zhuǎn)化提供更多的受體基因型。本研究以Alondra’s的幼胚為外植體,研究了培養(yǎng)基種類、不同激素等對其幼胚愈傷組織的誘導(dǎo)及其再生的影響。結(jié)果表明,在使用N6培養(yǎng)基時,添加3 mg.L-1的2,4-D并附加1000 mg.L-1的CH對其愈傷的誘導(dǎo)效果較好;添加4mg.L-1的ZT、不附加IAA對其分化效果最好。通過構(gòu)建植物表達載體pCAMBIA1301-220.6,利用基
2、因槍法將Hyg基因?qū)氲紸londra’s幼胚愈傷組織,以探索Alondra’s的高效遺傳轉(zhuǎn)化體系。最終在含100 mg.L-1潮霉素選擇培養(yǎng)基上篩選、分化,獲得了30株抗性植株,經(jīng)PCR檢測,其中5株為陽性轉(zhuǎn)基因植株,轉(zhuǎn)化率為0.5%。Alondra’s遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立豐富了小麥遺傳轉(zhuǎn)化的基因型,為小麥品種的轉(zhuǎn)基因改良和在不同背景中研究基因的功能奠定了良好的基礎(chǔ)。
農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化具有外源基因表達穩(wěn)定、一般為單拷貝等
3、優(yōu)點,遺傳轉(zhuǎn)化效率低、體系不穩(wěn)定限制了該轉(zhuǎn)化方法在小麥中的廣泛應(yīng)用。為了優(yōu)化農(nóng)桿菌介導(dǎo)的小麥遺傳轉(zhuǎn)化條件,本研究以普通小麥品種揚麥15和Alondra’s的幼胚產(chǎn)生的愈傷組織為受體材料,通過檢測Gus基因的瞬時表達情況,比較了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的主要影響因子的轉(zhuǎn)化效率。結(jié)果表明,在相同條件下兩個品種農(nóng)桿菌侵染的最佳條件不盡相同。揚麥15的最佳優(yōu)化條件為:先在不添加AS的培養(yǎng)基中預(yù)培養(yǎng),然后在菌液濃度為OD600=1.0、AS濃度為100μmol
4、/L條件下侵染10min,最后在25℃共培養(yǎng)1d;Alondra’s則在菌液濃度為OD600=0.5、共培養(yǎng)時間為2d時,表現(xiàn)出最佳的Gus基因瞬時表達率。
植物在逆境脅迫及病原菌侵染下,體內(nèi)活性氧會大量積累,從而破壞正常新陳代謝時清除平衡,活性氧的清除系統(tǒng)對于維持植物的正常生理功能及正常的新陳代謝具有重要的意義。因此,通過植物基因工程的方法,將能夠清除植物體內(nèi)活性氧類物質(zhì)的過氧化物酶基因?qū)氲骄C合性狀優(yōu)良的小麥品種中,對
5、于提高小麥的抗氧化脅迫能力有著重要的意義。本實驗室在揚麥5號及與其回交7代的小麥/簇毛麥6VS/6AL易位系為材料建立的白粉菌誘導(dǎo)的葉片SSH文庫中,克隆了一個小麥抗壞血酸過氧化物酶基因(Ta-APX),并發(fā)現(xiàn)該基因在白粉菌侵染初期發(fā)揮一定作用。為了進一步研究該基因在抗白粉病中的功能及其作用機制,研究其抗氧化能力與白粉菌侵染應(yīng)答的關(guān)系。本研究在構(gòu)建植物表達載體pAHC-Ta-APX的基礎(chǔ)上,利用基因槍法將其導(dǎo)入到小麥品種揚麥158的幼胚
6、愈傷組織。在含除草劑的培養(yǎng)基上經(jīng)過篩選和分化,最終獲得38株抗性再生植株。根據(jù)bar基因、ubi啟動子及目的基因序列設(shè)計引物,對38株再生植株進行PCR鑒定,最終共獲得10株含目的基因的陽性植株。為了研究轉(zhuǎn)基因植株的抗氧化脅迫性,分析了PEG6000誘導(dǎo)及白粉菌脅迫下T1代轉(zhuǎn)基因植株內(nèi)APX酶活性,結(jié)果表明,在兩種脅迫誘導(dǎo)下轉(zhuǎn)基因株系的APX酶活性均高于對照植株。在大田條件下對T1代轉(zhuǎn)基因植株進行抗白粉病和赤霉病接種鑒定,結(jié)果表明,轉(zhuǎn)基
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 中國野生葡萄抗壞血酸過氧化物酶基因表達載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)化初探.pdf
- 小麥過氧化物酶基因TaPrx的遺傳轉(zhuǎn)化及耐旱耐鹽功能鑒定.pdf
- 抗壞血酸過氧化物酶OsAPX2轉(zhuǎn)化大豆及耐旱功能分析.pdf
- 茶樹抗壞血酸過氧化物酶(APX)基因克隆及逆境脅迫下的表達特性與生理響應(yīng).pdf
- 番茄類囊體膜抗壞血酸過氧化物酶基因的克隆及功能分析.pdf
- 蘋果抗壞血酸過氧化物酶基因的克隆及其植物表達載體的構(gòu)建.pdf
- 水稻OsAPX2抗壞血酸過氧化物酶基因功能及抗逆性分析.pdf
- 茶葉抗壞血酸過氧化物酶(APX)的生理學(xué)與分子生物學(xué)研究.pdf
- 長葉紅砂抗壞血酸過氧化物酶基因的表達特性及功能分析.pdf
- 水稻抗壞血酸過氧化物酶基因OsAPX1表達載體構(gòu)建及功能分析.pdf
- 紫花苜蓿過氧化物酶基因(MsPrx)的克隆及表達與轉(zhuǎn)化研究.pdf
- 小麥籽粒過氧化物酶活性QTL分析及相關(guān)基因克隆和功能標(biāo)記開發(fā).pdf
- 鹽脅迫對小麥過氧化物酶活性影響的機理研究.pdf
- 植物過氧化物酶提取及電泳
- 細胞色素c向過氧化物酶結(jié)構(gòu)—功能的轉(zhuǎn)化研究.pdf
- 溶酶體及過氧化物酶體
- 溶酶體過氧化物酶體
- 乳過氧化物酶體系的激活及應(yīng)用.pdf
- 農(nóng)桿菌介導(dǎo)小麥成熟胚遺傳轉(zhuǎn)化體系建立和遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf
- 髓過氧化物酶基因影響房顫發(fā)生分子遺傳機制研究.pdf
評論
0/150
提交評論