根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的小麥抗白粉病基因轉(zhuǎn)化及小麥小孢子培養(yǎng)研究.pdf

1、小麥?zhǔn)侵袊褪澜缟现匾募Z食作物之一,而病蟲害嚴(yán)重影響著其產(chǎn)量,因此培育高產(chǎn)、抗病的小麥新品種具有重要意義.而傳統(tǒng)培育小麥新品種的方法具有歷時(shí)長、效率低、目的性差等缺點(diǎn),所以采用新興生物技術(shù)特別是基因工程技術(shù)向小麥轉(zhuǎn)入抗病基因具有重要的理論意義和應(yīng)用價(jià)值.實(shí)驗(yàn)一以小麥愈傷組織為受體,利用農(nóng)桿菌菌株AGl1將大麥Mlo反義基因?qū)氩煌蛐托←?核生3號(hào)、揚(yáng)麥158、煙優(yōu)361.從核生3號(hào)和揚(yáng)麥158兩種基因型小麥獲得23棵轉(zhuǎn)基因植株,P

2、CR陽性頻率分別為1.9﹪和2.8﹪.PCR及Southern分析證明,外源基因已整合到小麥基因組并遺傳給后代.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,篩選壓力的存在對轉(zhuǎn)基因植株的獲得至關(guān)重要,在無篩選壓力下未獲得轉(zhuǎn)基因植株.7棵轉(zhuǎn)基因植株移栽大田后正常結(jié)實(shí).將轉(zhuǎn)基因植株種植在溫室和大田中,待白粉病發(fā)作時(shí)期分析其抗病性,結(jié)果表明,部分轉(zhuǎn)基因植株具有明顯的白粉病抗性.實(shí)驗(yàn)二采用了以小麥苗端為受體的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化方法.選擇長至2~3cm的核生3號(hào)、煙優(yōu)361、濟(jì)南177

3、三種基因型小麥幼苗,去除苗端,露出生長點(diǎn),以O(shè)D<,600>=1.0左右的農(nóng)桿菌菌液浸染,從三種基因型小麥,都得到了轉(zhuǎn)基因植株,轉(zhuǎn)化頻率分別為8.3﹪,13.09﹪,11﹪.實(shí)驗(yàn)表明,苗端轉(zhuǎn)化法能大大提高轉(zhuǎn)化率,是一種有效的小麥遺傳轉(zhuǎn)化方法.實(shí)驗(yàn)三進(jìn)行了小麥小孢子培養(yǎng)的初步研究.小孢子培養(yǎng)是在花粉培養(yǎng)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的新技術(shù).因小孢子是單細(xì)胞且能再生純合植株,因此,通過對轉(zhuǎn)基因植物的小孢子進(jìn)行培養(yǎng),可以快速獲得純合體,使轉(zhuǎn)基因品系盡快應(yīng)