百合多糖分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定及其生物活性研究.pdf

1、近年來(lái)，百合多糖因其特有的抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤及降血糖等活性而引起研究者關(guān)注。目前，對(duì)百合多糖的研究大多集中在粗多糖上，而對(duì)其進(jìn)行分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定及生物活性深入系統(tǒng)的研究報(bào)道還很少。
　　宜興百合（Lilium lancifolium Thunb.）是我國(guó)三大食用百合中藥用價(jià)值最高的品種。本研究以宜興百合鱗莖為原料，研究其多糖的分離純化、基本理化性質(zhì)、化學(xué)結(jié)構(gòu)及體外抗氧化、免疫調(diào)節(jié)活性。主要結(jié)果如下:
　　1、超聲波輔

2、助水提醇沉法獲得百合粗多糖，得率為9.46％。用DEAE-SepharoseFast Flow層析柱、Sephadex G-100層析柱相繼對(duì)粗多糖進(jìn)行分離和純化，得到3個(gè)組分LLPS-1、LLPS-2和LLPS-3，得率分別是1.66％、1.71％和0.28％。高效液相凝膠過(guò)濾色譜法證明LLPS-1、LLPS-2和LLPS-3都是相對(duì)均一的多糖組分，具有較高的純度，其相對(duì)分子量分別為350.51kDa、403.29 kDa和146.1

3、8kDa。
　　2、采用苯酚-硫酸法、考馬斯亮藍(lán)法、硫酸-咔唑法和氯化鋇-明膠法分別測(cè)定粗多糖和純化組分LLPS-1、LLPS-2和LLPS-3中的總糖、蛋白質(zhì)、糖醛酸及硫酸基含量。結(jié)果表明:粗多糖中的總糖含量為78.01％、LLPS-1、LLPS-2和LLPS-3中的總糖分別為97.40％、96.19％和79.69％;粗多糖中蛋白質(zhì)含量是3.61％，而純化百合多糖中不含蛋白質(zhì);糖醛酸含量分別是6.33％、14.83％、12.19

4、％和37.34％;硫酸基含量分別是1.34％、0.55％、0.43％和0.65％。LLPS-1、LLPS-2和LLPS-3中不合有淀粉及酚類(lèi)物質(zhì)。
　　3、多糖結(jié)構(gòu)分析:
　　(1)元素分析結(jié)果表明:百合多糖純化組分的組成元素主要是C、H元素和微量的S元素，不含N元素。
　　(2)高效陰離子交換色譜法分析LLPS-1、LLPS-2和LLPS-3中單糖的種類(lèi)及比例，結(jié)果為:LLPS-1多糖主鏈主要由葡萄糖和甘露糖按約2∶

5、1的摩爾比組成，含有微量的阿拉伯糖（每隔約42個(gè)糖單元有一個(gè)阿拉伯糖），可能含有極微量的巖藻糖和半乳糖。LLPS-2多糖主鏈主要由葡萄糖和甘露糖按1∶1的摩爾比組成，可能含有微量的阿拉伯糖（每隔約53個(gè)糖單元有一個(gè)阿拉伯糖）。LLPS-3多糖主鏈主要由阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖按約2∶2∶2∶1的摩爾比組成，含有微量的半乳糖醛酸（即每隔約34個(gè)糖單元有一個(gè)半乳糖醛酸）。
　　(3)紅外光譜及核磁共振分析表明:LLPS-1、L

6、LPS-2和LLPS-3的糖環(huán)形式均為吡喃糖環(huán);LLPS-1和LLPS-2的糖苷鍵均為β型，LLPS-3的糖苷鍵構(gòu)型既有α型又有β型，以α型為主。研究結(jié)果還證明LLPS-1和LLPS-2中存在β-D-葡萄糖和β-D-甘露糖;LLPS-3組分中存在D-葡萄糖、α-D-甘露糖、α-D-半乳糖和鼠李糖。
　　(4)高碘酸氧化及Smith降解結(jié)果表明:LLPS-1、LLPS-2兩個(gè)組分中糖苷鍵連接方式是以1→4鍵型為主，含有少量1→2或1

7、→6鍵型，葡萄糖和甘露糖存在不被高碘酸氧化的1→3鍵型。LLPS-3中甘露糖、阿拉伯糖和半乳糖以1→3鍵型為主，還含有1→4、1→2或1→6鍵型。
　　(5)X-衍射分析表明:LLPS-1、LLPS-2和LLPS-3整個(gè)樣品呈近似無(wú)定形狀態(tài)，其中含結(jié)晶性的多糖或多糖復(fù)合物極少，結(jié)晶度非常低，只包含微量的晶體結(jié)構(gòu)。
　　4、采用化學(xué)方法研究百合多糖體外抗氧化活性，結(jié)果表明，粗多糖、LLPS-1和LLPS-2有較強(qiáng)的清除OH·自

8、由基能力，適度的清除H202能力和較弱的還原力及清除02·自由基能力。在一定濃度范圍內(nèi)，抗氧化活性隨著多糖濃度增大而增強(qiáng)?？偟膩?lái)說(shuō)，抗氧化活性強(qiáng)弱的順序?yàn)?粗多糖＞ LLPS-2＞LLPS-1。
　　5、采用體外巨噬細(xì)胞RAW264.7模型研究百合多糖體外免疫調(diào)節(jié)活性，結(jié)果表明，在25～400μg/mL范圍內(nèi)，LLPS-1和LLPS-3對(duì)巨噬細(xì)胞增殖活性影響是隨著濃度增加先升高后降低，100μg/mL達(dá)到最大值;LLPS-2則是增

9、殖活性一直升高，在400μg/mL時(shí)和陽(yáng)性對(duì)照LPS無(wú)顯著差異(p＞0.05)。3種純化組分隨濃度增加，刺激小鼠巨噬細(xì)胞吞噬中性紅的能力先增強(qiáng)后略微減弱，在50～400μg/mL濃度范圍內(nèi)極顯著高于空白對(duì)照(p＜0.01)。3種純化組分對(duì)NO釋放的影響是隨著濃度增加，釋放的NO濃度逐漸升高，其活性呈一定劑量依賴(lài)性，在很低濃度(25μg/mL)就能極顯著促進(jìn)巨噬細(xì)胞釋放NO，在400μg/mL時(shí)極顯著高于空白對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照(p＜0.01)