攜rtPA靶向血栓多功能MR分子探針的構建及表征.pdf

1、目的:制備攜帶溶栓藥物重組組織型纖溶酶原激活劑(Recombinanttissue plasminogen activator, rtPA)的靶向血栓MR分子探針，并對其一般理化性能、體內外靶向血栓能力、溶栓能力及MR顯影能力進行驗證。
　　方法:采用碳二亞胺法將環(huán)狀精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽段(Cyclicarginine-glycine-aspartic，cRGD)連接于殼聚糖(Chitosan，CS)膜表面，得到CS-cRG

2、D膜;雙乳化溶劑揮發(fā)法（水/油/水法[W/O/W]）制備攜帶rtPA及載Fe3O4的聚乳酸羥基乙酸(Poly[lactic-co-glycolic acid]，PLGA)納米粒，通過制備條件的調整，分別得到Fe3O4-PLGA、Fe3O4-PLGA-rtPA、Fe3O4-PLGA-rtPA/CS及Fe3O4-PLGA-rtPA/C S-cRGD納米粒。用光學顯微鏡、透射電鏡及激光粒度儀檢測納米粒的形態(tài)、分散性、結構、粒徑、粒徑分布及Ze

3、ta電位，激光共聚焦顯微鏡及流式細胞儀驗證CS-cRGD膜對納米粒表面的被覆，Fe3O4攜帶率及rtPA包封率分別用原子吸收光譜法及比色法測得，rtPA的體外釋放活性用生色底物法檢測。經體外靶向血栓病理切片及靶向溶栓實驗證實納米粒對體外血栓的靶向溶解能力后，分別用1.5 T及3.0 TMR掃描儀驗證納米粒的弛豫性能及對體內外血栓的靶向溶解顯影能力。
　　結果:各組納米粒均成功制得，形態(tài)規(guī)則，表面光滑呈球形，分散性好，粒徑較均一，透

4、射電鏡可見Fe3O4顆粒均勻鑲嵌于納米粒殼上，Fe3O4-PLGA-rtPA/CS-cRGD納米粒的平均粒徑為395.2±12.2 nm，粒徑分布（多分散系數[polydispersity index，PDI]）為0.163±0.024，Zeta電位為29.0±1.5 mV。激光共聚焦顯微鏡顯示Fe3O4-PLGA-rtPA/CS-cRGD納米?？梢姯h(huán)狀綠色熒光，即異硫氰酸熒光素(Fluoresceinisothiocyanate，FI

5、TC)標記的cRGD成功被覆于納米粒表面，流式細胞儀測得cRGD攜帶率為84.27％。Fe3O4攜帶率及rtPA包封率分別為49.3±3.4％，63.7±1.5％，體外釋放實驗顯示Fe3O4-PLGA-rtPA/CS及Fe3 O4-PLGA-rtPA/CS-cRGD納米粒中釋放的rtPA的酶活性明顯高于Fe3O4-PLGA-rtPA納米粒。體外靶向血栓病理切片可見大量Fe3O4-PLGA-rtPA/CS-cRGD納米粒聚集于血栓周邊，體

6、外靶向溶栓實驗示Fe3O4-PLGA-rtPA、Fe3O4-PLGA-rtPA/CS和Fe3O4-PLGA-rtPA/CS-cRGD組溶栓率在60分鐘時分別為游離rtPA溶液的1.98、2.41、3.05倍。在MRI掃描中各組載Fe3O4的納米粒均可顯著降低T2*信號，與純Fe3O4溶液相比，其橫向弛豫率（Transverse relaxation rate，R2*）及信噪比(Signal-to-noise ratio，SNR)無顯著差