多功能納米探針靶向胃癌腫瘤的雙模式成像與安全性評價研究.pdf

1、胃癌是全球致死率最高的惡性腫瘤之一,嚴(yán)重威脅著人們健康和生命安全。胃癌的早期發(fā)現(xiàn)和明確診斷有重要的臨床意義,尤其對早期胃癌的確診,能顯著提高患者的生存率和生存質(zhì)量。而目前常用的胃癌檢測方法又具有一定的缺陷,因此急需一種適合胃癌早期普查的技術(shù)方法。隨著納米科學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)的迅猛發(fā)展,我們結(jié)合生物技術(shù)設(shè)計和制備出一種安全性高、具有胃癌靶向成像能力的納米熒光探針,并評估對其活體胃癌靶向能力,實現(xiàn)早期胃癌的超敏感檢測。同時,納米材料的生物安全性

2、也是不容忽視的問題,直接關(guān)系到其今后的使用范圍和實際的臨床應(yīng)用價值。針對上述問題,本課題展開了以下幾方面研究工作:1、熒光磁性納米粒子生物安全性評價。
　　 分別將不同劑量FMNPs粒子(20μg/mL,50μg/mL,100μg/mL)加入MGC803胃癌細胞共育1天至4天;小鼠尾部靜脈注射不同濃度的FMNPs粒子(0.1mg/mL,0.25mg/mL,0.4mg/mL)溶液,分三組飼養(yǎng)1天、7天和30天,然后采用MTT、TE

3、M、流式細胞術(shù)和組織病理學(xué)等技術(shù)評價熒光磁性納米粒子的生物安全性。結(jié)果表明,FMNPs粒子MGC803細胞安全毒性劑量為50μg/mL以下,生物安全性與注射粒子濃度和時間密切相關(guān),濃度越大、時間越長,生物慢毒性越明顯。FMNPs粒子在體主要分布在小鼠的肺部、肝臟和脾臟,體內(nèi)注射最大劑量0.4mg/mL無急性毒性表現(xiàn),生物安全性好。
　　 2、多功能納米探針靶向胃癌模型雙模式成像。
　　 設(shè)計和制備anti-BRCAA1-

4、FMNPs多功能探針,并建立裸鼠胃癌腫瘤模型,待腫瘤直徑達到5mm,尾靜脈注射0.25mg/mL anti-BRCAA1-FMNPs溶液,分別通過小動物活體成像、免疫熒光技術(shù)和小動物核磁共振成像、組織TEM技術(shù)評價其胃癌腫瘤靶向成像。實驗結(jié)果表明,BRCAA1蛋白在胃癌組織中表達量高于正常胃組織。Anti-BRCAA1-FMNPs探針注入裸鼠體內(nèi)6h后在胃癌腫瘤區(qū)域熒光信號值達到最高峰,12h后信號急劇衰減。同時,在外加磁場的作用下,腫

5、瘤區(qū)域的磁信號也明顯強于其他區(qū)域。因此,anti-BRCAA1-FMNPs探針活體熒光信號明顯,具有較好的磁響應(yīng)強度,胃癌在體靶向性能顯著,生物安全性好,是一種理想的生物成像材料。
　　 3、氧化石墨烯生物安全性評價。
　　 研究一種新型的納米材料氧化石墨烯GO對人成纖維HDF細胞凋亡、細胞周期的影響及其活體動物的安全性評價。分別將不同劑量GO粒子(20μg/mL,50μg/mL,100μg/mL)加入HDF細胞共育1天

6、至4天:小鼠尾部靜脈注射不同濃度的GO粒子(0.1 mg/mL,0.25mg/mL,0.4mg/mL)溶液,分三組飼養(yǎng)1天、7天和30天,然后采用MTT、TEM、流式細胞術(shù)和組織病理學(xué)等技術(shù)評價熒光磁性納米粒子的生物安全性。結(jié)果表明,GO粒子HDF細胞安全毒性劑量為50μg/mL以下。GO粒子在體主要分布在肺、肝臟和脾臟,生物安全性與注射粒子濃度和時間密切相關(guān),低劑量短時間低毒性,低劑量長時間慢毒性;高劑量短時間急毒性,高劑量長時間致死