轉(zhuǎn)基因小麥外源avenin-like b突變基因的遺傳穩(wěn)定性研究.pdf

1、小麥Avenin-like蛋白的突出特點(diǎn)是富含半胱氨酸殘基(18個(gè)或19個(gè))，推測(cè)其中部分半胱氨酸殘基可參與形成分子間二硫鍵，進(jìn)而作用于小麥面粉的加工品質(zhì)。課題組前期研究已證實(shí)Avenin-like b蛋白對(duì)小麥的加工品質(zhì)具有顯著的正向效應(yīng)，但其作用機(jī)理尚未揭示清楚。深入探究Avenin-like b蛋白影響小麥加工品質(zhì)的作用機(jī)理具有重要的理論與實(shí)際意義。
　　小麥Avenin-like b蛋白在N-和C-端存在三個(gè)非保守性半胱氨

2、酸殘基位置。本文將avenin-like b基因進(jìn)行定點(diǎn)突變，獲得突變基因avenin-like b*，所編碼蛋白C-端特定非保守性位置的酪氨酸突變?yōu)榘腚装彼幔粯?gòu)建小麥avenin-like b*突變基因的真核表達(dá)載體，進(jìn)而采用基因槍法轉(zhuǎn)化小麥品種鄭麥9023，經(jīng)組織培養(yǎng)獲得轉(zhuǎn)基因植株。在分子水平上，采用PCR和Southern blot技術(shù)，檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植株中外源基因的整合；在蛋白水平上，運(yùn)用SDS-PAGE和Western blot技

3、術(shù)，檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植株中目的基因的穩(wěn)定表達(dá)，希望得到純合的轉(zhuǎn)基因株系。本研究結(jié)果如下：
　　(1)采用定點(diǎn)突變合成avenin-like b*基因，并構(gòu)建小麥pLRPT-avel*真核表達(dá)載體；
　　(2)利用基因槍法將avenin-like b*基因轉(zhuǎn)化到鄭麥9023盾片中，經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)、分化、生根培養(yǎng)和PCR鑒定后獲得10株轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性株系；
　　(3)PCR及Southern blot分析表明，外源avenin-like