IGF-I轉基因羊基因穩(wěn)定性分析.pdf

1、轉基因技術從產(chǎn)生到現(xiàn)在，經(jīng)歷了幾十年的發(fā)展過程，特別是近十年來，更是有了突飛猛進的發(fā)展。研究人員對轉基因動物的要求已經(jīng)從最初的獲得轉基因動物轉化成為利用轉基因技術為人類優(yōu)質生活服務的目標上來。
　　目的：本實驗研究對象為類胰島素樣生長因子 I（IGF-I）轉基因細毛羊及其后代，以導入到宿主體內的外源基因 IGF-I為研究目標，通過對 IGF-I轉基因細毛羊外源基因的整合位點、拷貝數(shù)、轉錄和翻譯水平進行研究，旨在為外源基因的功能研究

2、奠定基礎，為轉基因細毛羊的高效生產(chǎn)提供借鑒。
　　方法：試驗一：對本實驗室構建的 IGF-I轉基因細毛羊及其后代進行陽性個體鑒定。根據(jù)外源基因質粒序列設計特異性引物，采用 PCR法對本實驗室構建的轉基因細毛羊進行陽性個體鑒定。試驗二：利用實時熒光定量 PCR技術，設計實時熒光定量 PCR引物，對鑒定結果為陽性的轉基因細毛羊外源基因拷貝數(shù)進行檢測。試驗三：通過相對實時熒光定量 PCR技術對轉基因細毛羊皮膚組織 IGF-I mRNA表

3、達水平進行分析。試驗四：利用 Western免疫印跡法，通過對外源基因在轉基因細毛羊皮膚組織及內臟蛋白的表達定量分析，對外源基因翻譯水平進行檢測。試驗五：采用染色體步移技術，提取轉基因細毛羊基因組 DNA，對外源基因在 IGF-I轉基因細毛羊基因組 DNA上的整合位點進行分析。
　　結果：試驗一：結果表明：轉 IGF-I基因細毛羊0152、0016、118、0217四只細毛羊均為 IGF-I轉基因細毛羊。試驗二：結果表明：IGF-

4、I轉基因細毛羊0152、0016、118、0217外源基因的拷貝數(shù)分別為3、1、1、1。實驗三：結果表明：IGF-I基因在皮膚組織中的相對表達量在 IGF-I轉基因細毛羊0152、0016、118、0217分別為對照組細毛羊相對表達量的2.87倍、2.03倍、1.86倍和1.85倍，差異均極顯著（P<0.01）。轉基因原代羊0016皮膚組織中 IGF-I基因的表達量分別是一代羊118和0217的178.9％倍和150%，差異極顯著（P<

5、0.01）；轉基因原代羊0152 IGF-I基因在皮膚組織中的相對表達量分別是其后代118和0217的207%和174%，差異極顯著（P<0.01）。原代羊0152與0016皮膚組織中 IGF-I基因的相對表達量差異不顯著（P>0.05）；一代羊118和0217皮膚組織中的 IGF-I基因相對表達量差異不顯著（P>0.05）。實驗四：結果表明：IGF-I蛋白在 IGF-I轉基因細毛羊0152、0016、118、0217皮膚組織的相對表達

6、量分別為1.55、1.08、0.55、0.62，其表達量分別為相同年齡普通細毛羊的213%、187%、129%、127%，差異均極顯著（P<0.01）。IGF-I轉基因細毛羊0152內臟器官 IGF-I蛋白表達與普通細毛羊比較結果顯示：IGF-I蛋白在轉基因細毛羊心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、肌肉和皮膚的相對表達量分別為0.348、2.571、0.863、0.731、0.316、0.124、0.481，普通細毛羊 IGF-I蛋白相對表達

7、量在心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、肌肉和皮膚相對表達量分別為0.357、2.564、0.847、0.727、0.304、0.127、0.215，除在皮膚組織 IGF-I蛋白相對表達量 IGF-I轉基因細毛羊0152為普通細毛羊223.8%，差異極顯著（P<0.01），其余組織器官IGF-I蛋白的相對表達量在轉基因細毛羊0152和普通細毛羊之間差異不顯著（P>0.05）。實驗五：結果表明：外源基因插入位點在 IGF-I轉基因細毛羊0152