紅麻Bt基因遺傳轉(zhuǎn)化及其遺傳穩(wěn)定性研究.pdf

1、為促進(jìn)紅麻抗蟲轉(zhuǎn)基因育種研究的發(fā)展，本研究以國(guó)家級(jí)重點(diǎn)推廣的6個(gè)紅麻高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)抗病新品種為受體，采用花粉管通道法(即柱頭滴加法和子房注射法)將抗蟲(Bt)基因?qū)胧荏w紅麻品種。通過對(duì)重點(diǎn)受體品種福紅952轉(zhuǎn)基因后代四個(gè)世代田間觀察抗蟲效果和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)蟲口喂養(yǎng)鑒定以及實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的PCR檢測(cè)、ISSR分子標(biāo)記檢測(cè)和Southern分子雜交驗(yàn)證鑒定，獲得了轉(zhuǎn)基因研究的階段性成果，并建立了紅麻簡(jiǎn)捷高效轉(zhuǎn)基因分子育種的有效途徑與核心技術(shù)體系。試驗(yàn)結(jié)果如

2、下： 1.Bt質(zhì)粒制備與純化：研究表明采用大量法制備含有抗蟲(Bt)目的基因的質(zhì)粒，經(jīng)過純化后其OD260/280在1.9-2.0即可用于轉(zhuǎn)基因； 2.遺傳轉(zhuǎn)化效率：采用柱頭滴加法和子房注射法得到的共處理紅麻花470朵，當(dāng)代結(jié)實(shí)率分別是68.8％和51.7％，后代少蟲口分別為7.2％和24.5％，經(jīng)PCR檢測(cè)兩種方法得到的總體轉(zhuǎn)化效率為0.48％；獲得具有抗蟲特性的紅麻品種福紅952； 3.抗蟲性室內(nèi)蟲口喂養(yǎng)鑒

3、定：將抗蟲的紅麻葉片與非轉(zhuǎn)基因的紅麻葉片做對(duì)照，在室內(nèi)進(jìn)行抗蟲喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，喂食后第二天死亡率達(dá)65.5％，第4天后全部死亡，而非抗蟲轉(zhuǎn)基因紅麻未表現(xiàn)明顯的抗蟲特性; 4.目的基因PCR分子檢測(cè)：對(duì)抗蟲轉(zhuǎn)基因紅麻福紅952的四個(gè)不同世代的紅麻葉片同時(shí)進(jìn)行PCR分子檢測(cè)，結(jié)果都檢測(cè)到了目的基因的特征條帶，其抗蟲特性能穩(wěn)定遺傳; 5.抗蟲特異穩(wěn)定性ISSR分子標(biāo)記檢測(cè)：首次對(duì)抗蟲轉(zhuǎn)基因紅麻進(jìn)行ISSR分子標(biāo)記檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)抗蟲紅麻與

4、非轉(zhuǎn)基因?qū)φ掌贩N的譜帶比較出現(xiàn)特異多態(tài)性；結(jié)果表明ISSR分子標(biāo)記可用于抗蟲轉(zhuǎn)基因檢測(cè)； 6.抗蟲遺傳穩(wěn)定性分子雜交檢驗(yàn)：采用地高辛Southern分子雜交對(duì)4個(gè)不同世代抗蟲轉(zhuǎn)基因紅麻進(jìn)行檢測(cè)，四個(gè)遺傳世代都檢測(cè)到了三條目的條帶，分別是約為2500bp、1500bp和680bp大小的片斷。 7.抗蟲轉(zhuǎn)基因紅麻福紅952育成：從97個(gè)少蟲口轉(zhuǎn)基因紅麻T2代中，在海南高密度蟲口下田間自然鑒定，已獲得三個(gè)具明顯抗蟲特性的轉(zhuǎn)基因