糖尿病視網(wǎng)膜病變大鼠視網(wǎng)膜CTGF表達(dá)及辛伐他汀干預(yù)作用.pdf

1、目的：
　　 1.建立大鼠糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy，DR)模型，研究DR大鼠視網(wǎng)膜凋亡細(xì)胞和致纖維化因子結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connective tissue growthfactor，CTGF)隨糖尿病病程發(fā)展的表達(dá)情況及其對(duì)微循環(huán)改變的影響。
　　 2.探討DR大鼠玻璃體腔注射辛伐他汀對(duì)視網(wǎng)膜CTGF表達(dá)的影響。
　　 3.探討玻璃體腔注射辛伐他汀的安全性，為DR的治療提供理論

2、依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.2月齡雄性Wistar大鼠，體重200～220g，共100只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組及糖尿病組。糖尿病組大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)致糖尿病，根據(jù)其病程不同將其分為3個(gè)亞組，即糖尿病2、4、6個(gè)月組。HE染色觀察大鼠視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu)，以視網(wǎng)膜消化血管鋪片過碘酸雪夫(PAS)染色法觀察視網(wǎng)膜血管情況，末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記(YUNEL)法

3、檢測(cè)視網(wǎng)膜凋亡細(xì)胞，免疫組織化學(xué)法測(cè)定視網(wǎng)膜CTGF表達(dá)水平。
　　 2.存活至4個(gè)月的糖尿病大鼠30只，隨機(jī)選取20只，右眼玻璃體腔注射辛伐他汀，作為干預(yù)組，左眼玻璃體腔注射二甲基亞砜作為空白對(duì)照組，余10只糖尿病大鼠眼內(nèi)不注入任何藥物，作為糖尿病陽性對(duì)照組。HE染色觀察大鼠視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu)，以末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記(TUNEL)法檢測(cè)視網(wǎng)膜凋亡細(xì)胞，免疫組織化學(xué)法測(cè)定視網(wǎng)膜CTGF表達(dá)水平，并給予視網(wǎng)

4、膜電圖(electroretinogram，ERG)檢查。
　　 結(jié)果：
　　 1.糖尿病大鼠視網(wǎng)膜HE染色和正常對(duì)照組相比，糖尿病2個(gè)月時(shí)，視網(wǎng)膜各層開始變薄，排列紊亂，部分血管擴(kuò)張，4個(gè)月時(shí)可見視網(wǎng)膜內(nèi)界膜略腫脹，表面不平，增厚，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞排列不整齊，6個(gè)月時(shí)，視網(wǎng)膜各層變薄、排列紊亂更加明顯，內(nèi)界膜水腫，部分血管擴(kuò)張更加明顯；視網(wǎng)膜消化鋪片血管PAS染色，正常對(duì)照組與糖尿病2個(gè)月時(shí)大鼠視網(wǎng)膜血管走形良好，4個(gè)月時(shí)視

5、網(wǎng)膜部分血管漸變僵硬、狹窄，6個(gè)月時(shí)視網(wǎng)膜血管主干僵硬，部分微血管狹窄明顯。糖尿病4個(gè)月時(shí)視網(wǎng)膜血管周細(xì)胞數(shù)量開始減少，6個(gè)月時(shí)周細(xì)胞數(shù)量進(jìn)一步減少(t=3.367，6.667；P<0.05)；糖尿病2、4、6個(gè)月大鼠視網(wǎng)膜凋亡指數(shù)逐漸增加(t2-4=21.432，t2-6=50.843，t4-6=29.410；P<0.05)，視網(wǎng)膜CTGF表達(dá)水平逐漸增高(t2-4=15.345，t2-6=26.316，t4-6=10.971；P<0

6、.05)。
　　 2.DR大鼠玻璃體腔注射辛伐他汀7天后，干預(yù)組大鼠視網(wǎng)膜CTGF表達(dá)水平較糖尿病陽性對(duì)照組及空白對(duì)照組明顯降低(t=12.112，1.257；P<0.05)；干預(yù)組大鼠視網(wǎng)膜凋亡指數(shù)較糖尿病陽性對(duì)照組及空白對(duì)照組明顯降低(t=4.745，4.802；P<0.05)；病理檢查結(jié)果顯示，糖尿病陽性對(duì)照組與空白對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜各層組織水腫，細(xì)胞排列紊亂，干預(yù)組大鼠視網(wǎng)膜各層組織水腫減輕，細(xì)胞排列漸規(guī)則；大鼠玻璃體腔注

7、射辛伐他汀后，無全身毒副反應(yīng)，無晶狀體混濁、無色素膜反應(yīng)及眼內(nèi)炎等眼部病變，ERG檢查未見明顯變化。
　　 結(jié)論：
　　 1.成功建立DR大鼠模型，隨糖尿病病程延長(zhǎng)DR大鼠視網(wǎng)膜致纖維化因子CTGF和凋亡細(xì)胞產(chǎn)生逐漸增多，且均較微循環(huán)血管走形及周細(xì)胞的改變發(fā)生早。
　　 2.辛伐他汀對(duì)DR大鼠視網(wǎng)膜CTGF的表達(dá)具有一定的抑制作用。
　　 3.玻璃體腔注射辛伐他汀治療DR具有一定的安全性，為DR的治療提供