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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
1.建立大鼠糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy,DR)模型,研究DR大鼠視網(wǎng)膜凋亡細(xì)胞和致纖維化因子結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connective tissue growthfactor,CTGF)隨糖尿病病程發(fā)展的表達(dá)情況及其對(duì)微循環(huán)改變的影響。
2.探討DR大鼠玻璃體腔注射辛伐他汀對(duì)視網(wǎng)膜CTGF表達(dá)的影響。
3.探討玻璃體腔注射辛伐他汀的安全性,為DR的治療提供理論
2、依據(jù)。
方法:
1.2月齡雄性Wistar大鼠,體重200~220g,共100只,隨機(jī)分為正常對(duì)照組及糖尿病組。糖尿病組大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)致糖尿病,根據(jù)其病程不同將其分為3個(gè)亞組,即糖尿病2、4、6個(gè)月組。HE染色觀察大鼠視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu),以視網(wǎng)膜消化血管鋪片過碘酸雪夫(PAS)染色法觀察視網(wǎng)膜血管情況,末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記(YUNEL)法
3、檢測(cè)視網(wǎng)膜凋亡細(xì)胞,免疫組織化學(xué)法測(cè)定視網(wǎng)膜CTGF表達(dá)水平。
2.存活至4個(gè)月的糖尿病大鼠30只,隨機(jī)選取20只,右眼玻璃體腔注射辛伐他汀,作為干預(yù)組,左眼玻璃體腔注射二甲基亞砜作為空白對(duì)照組,余10只糖尿病大鼠眼內(nèi)不注入任何藥物,作為糖尿病陽性對(duì)照組。HE染色觀察大鼠視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu),以末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記(TUNEL)法檢測(cè)視網(wǎng)膜凋亡細(xì)胞,免疫組織化學(xué)法測(cè)定視網(wǎng)膜CTGF表達(dá)水平,并給予視網(wǎng)
4、膜電圖(electroretinogram,ERG)檢查。
結(jié)果:
1.糖尿病大鼠視網(wǎng)膜HE染色和正常對(duì)照組相比,糖尿病2個(gè)月時(shí),視網(wǎng)膜各層開始變薄,排列紊亂,部分血管擴(kuò)張,4個(gè)月時(shí)可見視網(wǎng)膜內(nèi)界膜略腫脹,表面不平,增厚,神經(jīng)節(jié)細(xì)胞排列不整齊,6個(gè)月時(shí),視網(wǎng)膜各層變薄、排列紊亂更加明顯,內(nèi)界膜水腫,部分血管擴(kuò)張更加明顯;視網(wǎng)膜消化鋪片血管PAS染色,正常對(duì)照組與糖尿病2個(gè)月時(shí)大鼠視網(wǎng)膜血管走形良好,4個(gè)月時(shí)視
5、網(wǎng)膜部分血管漸變僵硬、狹窄,6個(gè)月時(shí)視網(wǎng)膜血管主干僵硬,部分微血管狹窄明顯。糖尿病4個(gè)月時(shí)視網(wǎng)膜血管周細(xì)胞數(shù)量開始減少,6個(gè)月時(shí)周細(xì)胞數(shù)量進(jìn)一步減少(t=3.367,6.667;P<0.05);糖尿病2、4、6個(gè)月大鼠視網(wǎng)膜凋亡指數(shù)逐漸增加(t2-4=21.432,t2-6=50.843,t4-6=29.410;P<0.05),視網(wǎng)膜CTGF表達(dá)水平逐漸增高(t2-4=15.345,t2-6=26.316,t4-6=10.971;P<0
6、.05)。
2.DR大鼠玻璃體腔注射辛伐他汀7天后,干預(yù)組大鼠視網(wǎng)膜CTGF表達(dá)水平較糖尿病陽性對(duì)照組及空白對(duì)照組明顯降低(t=12.112,1.257;P<0.05);干預(yù)組大鼠視網(wǎng)膜凋亡指數(shù)較糖尿病陽性對(duì)照組及空白對(duì)照組明顯降低(t=4.745,4.802;P<0.05);病理檢查結(jié)果顯示,糖尿病陽性對(duì)照組與空白對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜各層組織水腫,細(xì)胞排列紊亂,干預(yù)組大鼠視網(wǎng)膜各層組織水腫減輕,細(xì)胞排列漸規(guī)則;大鼠玻璃體腔注
7、射辛伐他汀后,無全身毒副反應(yīng),無晶狀體混濁、無色素膜反應(yīng)及眼內(nèi)炎等眼部病變,ERG檢查未見明顯變化。
結(jié)論:
1.成功建立DR大鼠模型,隨糖尿病病程延長(zhǎng)DR大鼠視網(wǎng)膜致纖維化因子CTGF和凋亡細(xì)胞產(chǎn)生逐漸增多,且均較微循環(huán)血管走形及周細(xì)胞的改變發(fā)生早。
2.辛伐他汀對(duì)DR大鼠視網(wǎng)膜CTGF的表達(dá)具有一定的抑制作用。
3.玻璃體腔注射辛伐他汀治療DR具有一定的安全性,為DR的治療提供
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