磷酸化Akt和ADRP在高糖刺激的人腎小管上皮細(xì)胞中的表達(dá)研究.pdf

1、目的:糖尿病腎病是糖尿病患者的嚴(yán)重并發(fā)癥,可危及病人的生命。有許多因素涉及到糖尿病腎病的發(fā)生,如高血糖、炎癥因子、氧化應(yīng)激等。高糖可影響細(xì)胞的正常代謝和生理功能。有研究報(bào)道,糖尿病高糖環(huán)境可誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞甘油三酯的積聚,進(jìn)而影響細(xì)胞的功能甚至發(fā)生間質(zhì)纖維化,然而,確切的機(jī)制還不清楚。ADRP是脂滴形成的敏感標(biāo)記物,在很小的脂滴形成時(shí),即可檢測(cè)出ADRP的表達(dá)。PI3K/Akt通路是一個(gè)多功能的通路,影響細(xì)胞的增殖、凋亡和代謝。本研究

2、通過(guò)對(duì)高糖刺激的人腎小管上皮細(xì)胞中ADRP、phospho-Akt和Akt蛋白表達(dá)的檢測(cè),初步探討PI3K/Akt通路與糖尿病腎小管上皮細(xì)胞脂質(zhì)沉積的關(guān)系。
　　 方法:
　　 1.人腎小管上皮細(xì)胞由解放軍301醫(yī)院陳香美教授贈(zèng)送。細(xì)胞分組:正常糖組(glucose5mmol/L)、高糖組(glucose30mmol/L)和LY294002處理組(LY294002+glucose30mmol/L)。
　　 2.應(yīng)

3、用免疫細(xì)胞化學(xué)(immunocytochemistry,ICC)方法檢測(cè)高糖刺激下人腎小管上皮細(xì)胞中ADRP蛋白的表達(dá)。
　　 3.應(yīng)用免疫蛋白印跡(Western Blot)檢測(cè)phospho-Akt和Akt蛋白的表達(dá)。
　　 4.油紅O染色法檢測(cè)人腎小管上皮細(xì)胞中脂滴。
　　 結(jié)果:
　　 1.ADRP在高糖刺激的人腎小管上皮細(xì)胞中的表達(dá)
　　 采用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)ADRP蛋白在高糖刺激的

4、人腎小管上皮細(xì)胞中的表達(dá),結(jié)果顯示ADRP在人腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)于細(xì)胞漿;相比正常糖組的細(xì)胞,高糖刺激下的HKC細(xì)胞ADRP表達(dá)明顯增強(qiáng),呈棕黃色顆粒狀著色,經(jīng)分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P＜0.05。而經(jīng)LY294002處理后HKC細(xì)胞ADRP表達(dá)明顯減少。
　　 2.phospho-Akt和Akt在高糖刺激的人腎小管上皮細(xì)胞中的表達(dá)
　　 Western blot檢測(cè)顯示正常糖組和高糖組HKC細(xì)胞總Akt表達(dá)未見(jiàn)顯著差異,

5、定量分析分別為0.99±0.04和0.99±0.03;激活狀態(tài)的Akt,即磷酸化Akt在兩組間的表達(dá)不同,高糖組明顯高于正常糖組,分別為0.36±0.05和0.99±0.07,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。LY294002是PI3K/Akt通路的特異性抑制劑,有效地減少了HKC細(xì)胞磷酸化Akt的表達(dá),而對(duì)總Akt未見(jiàn)明顯影響。
　　 3.高糖誘導(dǎo)人腎小管上皮細(xì)胞脂質(zhì)合成增多
　　 油紅O染色顯示高糖刺激的HKC細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)紅染的細(xì)

6、小顆粒,而正常糖組細(xì)胞內(nèi)未見(jiàn)著色顆粒。經(jīng)LY294002處理后脂滴形成明顯減少。
　　 結(jié)論:
　　 1.高糖可誘導(dǎo)人腎小管上皮細(xì)胞脂滴標(biāo)記物ADRP的明顯表達(dá),提示糖尿病環(huán)境下,高糖是引起腎小管上皮細(xì)胞脂質(zhì)代謝異常的重要因素。
　　 2.高糖可同時(shí)上調(diào)磷酸化Akt和ADRP表達(dá),而抑制PI3K/Akt通路可有效減少ADRP表達(dá)和細(xì)胞內(nèi)脂滴,提示PI3K/Akt通路可能參與了高糖刺激下的人腎小管上皮細(xì)胞的脂質(zhì)代謝