組蛋白H3K9三甲基化(H3K9me3)與神經(jīng)系統(tǒng)高糖代謝記憶現(xiàn)象的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：
　　探究神經(jīng)系統(tǒng)中H3K9me3的表達與高糖代謝記憶現(xiàn)象的相關(guān)性。
　　方法：
　　一、高劑量STZ造模1型糖尿病小鼠，利用胰島素控制血糖的方法制備高糖代謝記憶模型，利用Western blot檢測腦皮質(zhì)和海馬組織中H3K9me3以及甲基化轉(zhuǎn)移酶SUV39H1的表達。
　　二、在三種神經(jīng)細胞模型中（神經(jīng)前體細胞、神經(jīng)元、HT22細胞系），給予高糖刺激不同時間，利用Western blot檢測H3K9me3

2、以及甲基化轉(zhuǎn)移酶SUV39H1對高糖刺激的敏感性。
　　三、在三種神經(jīng)細胞模型中，給予高糖刺激不同時間后，撤除高糖刺激后制備代謝記憶模型，檢測Western blot檢測H3K9me3以及甲基化轉(zhuǎn)移酶SUV39H1的表達并利用免疫熒光的方法，檢測H3K9me3在HT22的表達。
　　四、體外培養(yǎng)的HT22細胞中，研究高糖代謝記憶與異染色質(zhì)結(jié)構(gòu)改變的相關(guān)性。
　　（1）利用Western blot檢測高糖刺激以及撤除高糖

3、刺激后的H3K9me3和異染色質(zhì)蛋白HP1的表達。
　?。?）利用Real-Time PCR法檢測高糖刺激以及撤除高糖刺激后，大衛(wèi)星DNA的相對表達量。
　?。?）利用qChIP法檢測高糖刺激以及撤除高糖刺激后，大衛(wèi)星DNA區(qū)域中H3K9me3的相對占有率。
　　五、在HT22細胞高糖代謝記憶模型中，利用XFe/XF24分析儀和細胞線粒體壓力試劑盒檢測細胞能量代謝水平（OCR值），分析高糖代謝記憶與細胞能量代謝的關(guān)系。

4、
　　結(jié)果：
　?。?）糖尿病小鼠大腦中H3K9me3表達升高，在胰島素控制高糖血癥一周后的代謝記憶組H3K9me3的表達量仍高于正常對照組，并且與糖尿病組H3K9me3的表達相近；
　　（2）在三種神經(jīng)細胞模型中，H3K9me3的表達均對高糖刺激敏感，在短時間內(nèi)H3K9me3表達量迅速升高至峰值；撤除高糖刺激后，H3K9me3的高表達現(xiàn)象維持一定的時間，即記憶現(xiàn)象。
　?。?）在HT22細胞高糖代謝記憶模型中，