抑制組蛋白H3K9me3甲基化對豬克隆胚胎體外發(fā)育效率的影響.pdf

1、豬克隆技術(shù)又稱體細(xì)胞核移植，其在豬的繁殖、育種和遺傳資源保護(hù)、人類醫(yī)學(xué)、藥學(xué)及生命科學(xué)等領(lǐng)域都有非常重要的應(yīng)用價值。但克隆效率過低，約為1％（出生的克隆豬頭數(shù)/移植的克隆胚胎數(shù)）嚴(yán)重制約了該項(xiàng)技術(shù)的發(fā)展及應(yīng)用。引起克隆效率低下的重要原因之一是克隆胚胎重編程異常，因此，對胚胎發(fā)育關(guān)鍵基因進(jìn)行表達(dá)調(diào)控能改善豬克隆胚胎發(fā)育效率。
　　本研究旨在通過向豬供體細(xì)胞轉(zhuǎn)染抗SUV39H1/2（負(fù)責(zé)建立H3K9me3的組蛋白甲基化酶）的小干擾RN

2、A，或向豬克隆胚胎顯微注射KDM4A/B/KDM4D（可以特異擦除H3K9me3的組蛋白去甲基化酶）的mRNA來擦除豬克隆胚胎的H3K9me3，研究這2種方法對豬克隆胚胎在體外發(fā)育至囊胚過程中的發(fā)育效率的影響。
　　本研究構(gòu)建了人源KDM4A-pcDNA3.1(+)、鼠源 KDM4B-pcDNA3.1(+)和KDM4D-pcDNA3.1(+)三個表達(dá)載體，并在體外轉(zhuǎn)錄獲得了這三個基因的mRNA。然后向1細(xì)胞期豬克隆胚胎胞漿中顯微注

3、射KDM4A/B/D mRNA。同時，設(shè)計合成并篩選了SUV39H1/H2最優(yōu)的干擾RNA（siRNA），在豬克隆胚胎供體細(xì)胞中連續(xù)兩次共轉(zhuǎn)染SUV39H1/H2 siRNA。分別統(tǒng)計觀察兩種方法獲得的克隆胚胎體外發(fā)育至囊胚的效率，并于體外培養(yǎng)24h收集部分胚胎通過免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測H3K9me3表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：
　　（1）在克隆胚胎中顯微注射KDM4A/B/D基因轉(zhuǎn)錄的mRNA在一定程度上可以提高胚胎體外發(fā)育的囊胚率，但統(tǒng)