豬傳染性胃腸炎病毒膜蛋白親和多肽的篩選與鑒定.pdf

1、豬傳染性胃腸炎病毒是引起豬腹瀉的重要病原之一，豬傳染性胃腸炎廣泛存在于全世界，給養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的損失，因此豬傳染性胃腸炎病毒一直是豬病研究的熱點(diǎn)之一。M蛋白是TGE病毒粒子的主要結(jié)構(gòu)蛋白，在病毒粒子的裝配過程中起到重要作用，能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生干擾素。由于M基因序列高度保守，所以對M基因的研究為豬傳染性胃腸炎病毒分子生物學(xué)診斷侯選基因提供了理論依據(jù)。
　　 本研究將陽性質(zhì)粒pGEX-TGEV-M在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，以

2、表達(dá)純化后的M蛋白作為靶蛋白，利用噬菌體展示隨機(jī)12肽庫對其進(jìn)行了5輪淘選，在第2輪淘選時(shí)篩除標(biāo)簽蛋白，5輪淘選后篩選出10個(gè)與TGEV M蛋白特異性結(jié)合的噬菌體單克隆，將其中與M蛋白結(jié)合效果相對最高的三個(gè)噬菌體分別命名為phTGEV-M5、phTGEV-M6、phTGEV-M7，并對它們進(jìn)行了深入的研究，包括建立了基于噬菌體的鑒別診斷方法，這種方法能夠?qū)GEV從其它六種豬源病毒中成功的區(qū)分出來，實(shí)驗(yàn)證明所篩選的噬菌體對TGEV的特異

3、性。此外本研究還對phage-ELISA、antibody-ELISA以及反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)的敏感性進(jìn)行了比較，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示phage-ELISA的敏感性介于antibody-ELISA和RT-PCR之間。
　　 本研究將與病毒反應(yīng)性最高的7號噬菌體(HALTPIKYIPPG)合成多肽，命名為pepTGEV-M7，評價(jià)它的抗病毒能力。實(shí)驗(yàn)證明了多肽能夠與M蛋白特異性結(jié)合，蝕斑減少實(shí)驗(yàn)揭示了pepTGEV-M7預(yù)