人versican V1全長基因的克隆、表達.pdf

1、細胞外基質(zhì)是動物組織細胞外為細胞提供一個細胞外網(wǎng)架,在組織中或組織之間起支持作用的部分。此外,它還具有其它很多重要的功能。細胞外基質(zhì)的主要成分有蛋白聚糖,糖蛋白,膠原等。Versican是一種屬于lectican家族的大型硫酸軟骨素蛋白聚糖。通過選擇性拼接,versican存在至少四種單體V0,V1,V2,V3。結構上而言,versican包括兩個球蛋白結構域和一個硫酸軟骨素結合序列,即N端的G1區(qū)和C端的G3區(qū)及CS序列。CS序列可以

2、分為兩種選擇性拼接結構域,即CSα和CSβ。V0包含CSα和CSβ；V1僅包含CSβ而V2包含CSα；V3則沒有CS區(qū)。Versican分布非常廣泛,它與發(fā)育及組織損傷都有關系?，F(xiàn)有研究顯示versican可以影響細胞黏附、遷移、增殖和分化等。 本研究中,首先克隆了人versican V1基因及它的兩個突變體。一個是缺失CSβ區(qū)域的mute-V3;另一個是缺失G3區(qū)域的mute-G3。構建的真核表達載體pcDNA3.1-V1瞬

3、時轉(zhuǎn)染到293T細胞中以證明它們可以在胞內(nèi)進行有效地轉(zhuǎn)錄。它為進一步研究人類versican V1基因的功能及其作用機制奠定了基礎。 接著,為了研究versican在細胞內(nèi)的功能,本研究利用有效的RNA干擾系統(tǒng)一-pSUPER系統(tǒng)來構建小干擾RNA系統(tǒng)。已構建了五種不同的siRNA,其中pSUPER-841和pSUPER-2101干擾versican的G1區(qū)；pSUPER-3901干擾CSα區(qū)；pSUPER-5941干擾CSβ