白介素-37對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1活化的人肝星狀細(xì)胞的影響.pdf

1、目的:1.利用重組人白細(xì)胞介素-37（interleukin-37，IL-37）和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforming growth factor-beta1，TGF-β1)同時(shí)干預(yù)人LX2-肝星狀細(xì)胞（LX2-hepatic stellate cell，LX2-HSC），觀察重組人IL-37對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)活化的人LX2-HSC的增殖及凋亡的影響，并觀察其對(duì)人LX2-HSC表達(dá)的Ⅰ型膠原蛋白(collagen I，Col-Ⅰ

2、)、Ⅲ型膠原蛋白(collagenⅢ，Col-Ⅲ)的影響。2.初步探討重組人IL-37抗肝纖維化的作用及機(jī)制。
　　方法:1.細(xì)胞培養(yǎng):以RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)人LX2-HSC。2.實(shí)驗(yàn)分組:(1)空白對(duì)照組（A組）:只含有RPMI-1640培養(yǎng)基;(2)實(shí)驗(yàn)對(duì)照組（B組）:含TGF-β15ng/ml，不含重組人IL-37;(3)實(shí)驗(yàn)組（C組）:含TGF-β15ng/ml、重組人IL-37100ng/ml;(4)實(shí)驗(yàn)組（D組

3、）:含TGF-β15ng/ml、重組人IL-37200ng/ml;(5)實(shí)驗(yàn)組（E組）:含TGF-β15ng/ml、重組人IL-37400ng/ml。3.檢測(cè)人LX2-HSC的細(xì)胞吸光度并計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率，檢測(cè)細(xì)胞凋亡率及Col-Ⅰ、Col-Ⅲ的表達(dá):在各組不同濃度重組入IL-37作用下的人LX2-HSC分別培養(yǎng)12h、24h、48h后，用MTT法檢測(cè)人LX2-HSC的增殖情況，測(cè)量各組細(xì)胞吸光度，并通過細(xì)胞吸光度計(jì)算各組細(xì)胞增殖抑制

4、率;AnnexinⅤ-FITC/PI雙染細(xì)胞后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率;相同方法培養(yǎng)人LX2-HSC，收集藥物處理后的細(xì)胞上清液，用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA法）檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞上清液中Col-Ⅰ及Col-Ⅲ的濃度。4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:兩個(gè)隨機(jī)獨(dú)立樣本均數(shù)比較用t檢驗(yàn);多個(gè)樣本均數(shù)比較用單因素方差分析;多個(gè)樣本均數(shù)之間的兩兩比較用LSD法;結(jié)果均以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。采用SPSS17.0的統(tǒng)計(jì)軟件分析所有數(shù)據(jù)。
　　結(jié)果:

5、1.對(duì)人LX2-HSC的增殖抑制作用:在重組人IL-37與TGF-β1共培養(yǎng)12h、24h、48h后，各時(shí)間點(diǎn)A組與B組細(xì)胞吸光度比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，且B組細(xì)胞吸光度高于A組;B組、C組、D組、E組細(xì)胞吸光度及增殖抑制率比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，且隨著重組人IL-37濃度增加，各組細(xì)胞吸光度降低，細(xì)胞增殖抑制率增加;12h和24h時(shí)C組與D組、E組的細(xì)胞吸光度及細(xì)胞增殖抑制率比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，

6、D組與E組的細(xì)胞吸光度及細(xì)胞增殖抑制率比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);而48h時(shí)C組、D組、E組的細(xì)胞吸光度及細(xì)胞增殖抑制率比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。相同藥物濃度組各時(shí)間點(diǎn)的比較，結(jié)果顯示各藥物濃度組在各時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞吸光度及細(xì)胞增殖抑制率比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），且隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，各組細(xì)胞吸光度降低、細(xì)胞增殖抑制率增加。2.對(duì)人LX2-HSC凋亡率的影響:各時(shí)間點(diǎn)A組與B組細(xì)胞凋亡率比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.

7、05)，且B組細(xì)胞凋亡率低于A組;B組、C組、D組、E組的細(xì)胞凋亡率比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，且隨著重組人IL-37濃度增加，各組細(xì)胞凋亡率增高;12h和24h時(shí)C組與D組、E組的細(xì)胞凋亡率比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），D組與E組的細(xì)胞凋亡率比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);而48h時(shí)C組、D組、E組的細(xì)胞凋亡率比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。相同藥物濃度組各時(shí)間點(diǎn)的比較，結(jié)果顯示各藥物濃度組在各時(shí)間點(diǎn)之間的細(xì)胞凋

8、亡率的比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，且隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，各組細(xì)胞凋亡率也增加。3.對(duì)人LX2-HSC表達(dá)Col-Ⅰ、Col-Ⅲ的影響:各時(shí)間點(diǎn)A組與B組的Col-Ⅰ及Col-Ⅲ濃度比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，且B組的濃度高于A組;B組、C組、D組、E組的Col-Ⅰ及Col-Ⅲ濃度比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，且隨著重組人IL-37濃度增加，各組細(xì)胞表達(dá)Col-Ⅰ、Col-Ⅲ的濃度減少，但重組人IL-37干預(yù)的C組、D

9、組、E組表達(dá)的Col-Ⅰ、Col-Ⅲ的濃度無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。各藥物濃度組各時(shí)間點(diǎn)之間的比較結(jié)果顯示均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，即本實(shí)驗(yàn)所設(shè)置的培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)人LX2-HSC所表達(dá)的Col-Ⅰ、Col-Ⅲ的濃度還未呈現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論:1.5ng/ml TGF-β1可促進(jìn)人LX2-HSC增殖、促進(jìn)入LX2-HSC表達(dá)Col-Ⅰ和Col-Ⅲ。2.重組人IL-37可抑制TGF-β1活化的人LX2-HSC的增殖。3.重