轉(zhuǎn)化生長因子β1對種植體表面成骨細(xì)胞活性影響的研究.pdf

1、目的：通過觀察特定濃度的轉(zhuǎn)化生長因子β1(Transforming growth factorbetal，TGF-β1)在不同時間刺激體外培養(yǎng)種植體表面成骨細(xì)胞中幾種礦化相關(guān)蛋白[骨鈣素(osteocalcin，OC)，骨涎蛋白(bonesialoprotein，BSP)和Ⅰ型膠原蛋白(collagen-Ⅰ，COL-Ⅰ)]的表達(dá)情況，探討TGF-β1對種植體表面成骨細(xì)胞增殖分化的影響，為臨床種植體的設(shè)計及今后臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
　

2、　 方法：成品鈦片的表面處理（模擬體內(nèi)種植體），體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞接種于鈦片表面（模擬種植體植入后的體內(nèi)環(huán)境），將其分為刺激組和對照組。加入地塞米松、抗壞血酸和β-甘油磷酸鈉，誘導(dǎo)礦化，刺激組分別加入0.5ng/ml、10ng/ml的TGF-β1刺激細(xì)胞增殖和分化，分別收集刺激后第2d、5d、7d培養(yǎng)的細(xì)胞，每3d換液一次。通過RT-PCR(Reverse Transcription Polymerase Chain)檢測不同培養(yǎng)時間成

3、骨細(xì)胞中的礦化相關(guān)因子的OCmRNA，BSPmRNA，COLⅠmRNA表達(dá)，對照組不加TGF-β1。取對數(shù)生長期的成骨細(xì)胞，0.25％胰酶+0.02％EDTA消化，DMEM培養(yǎng)基混懸成單細(xì)胞懸液，計數(shù)細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)分為兩個濃度刺激組及一個對照組，按每孔1×105個細(xì)胞接種于6孔培養(yǎng)板中，置于37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁后更換培養(yǎng)液，DMEM+50ng抗壞血酸+10mMβ-甘油酸鈉+5nM地塞米松，分別加入0.5ng/ml、10n

4、g/ml的TGF-β1刺激細(xì)胞，對照組不加TGF-β1。分別收集培養(yǎng)后第2d、5d、7d的細(xì)胞，應(yīng)用RT-PCR檢測蛋白表達(dá)情況并做對比分析。實(shí)驗(yàn)中所有數(shù)據(jù)采用SPSS16.0軟件作統(tǒng)計處理分析，比較各組間差異程度，P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果：濃度為0.5ng/ml的外源性TGF-β1加入到接種于模擬體內(nèi)種植體的鈦片表面的成骨細(xì)胞中后，均可顯著增加成骨細(xì)胞中幾種礦化相關(guān)蛋白[骨鈣素(osteocalcin，O

5、C)，骨涎蛋白(bonesialoprotein，BSP)和Ⅰ型膠原蛋白(collagen-Ⅰ，COL-Ⅰ)]的表達(dá)(P＜0.05)；而濃度為10ng/ml的外源性TGF-β1加入到接種于模擬體內(nèi)種植體的鈦片表面的成骨細(xì)胞中后，均可降低成骨細(xì)胞中幾種礦化相關(guān)蛋白[骨鈣素(osteocalcin，OC)，骨涎蛋白(bonesialoprotein，BSP)和Ⅰ型膠原蛋白(collagen-Ⅰ，COL-Ⅰ)]的表達(dá)(P＜0.05)。TGF-

6、β1刺激后的OC、BSP和COL-Ⅰ在不同時間培養(yǎng)的成骨細(xì)胞中的表達(dá)在凝膠成像系統(tǒng)光密度分析后可見與對照組中表達(dá)量相比，低濃度刺激組表達(dá)量略有升高，高濃度刺激組表達(dá)量略有降低。SPSS16.0軟件作統(tǒng)計處理分析P＜0.05，變化有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)論：濃度為0.5ng/ml的外源性TGF-β1對加入到接種于模擬體內(nèi)種植體的鈦片表面的成骨細(xì)胞中的骨鈣素(osteocalcin，OC)，骨涎蛋白(bonesialoprotein

7、，BSP)和Ⅰ型膠原蛋白(collagen-Ⅰ，COL-Ⅰ)的表達(dá)有一定的促進(jìn)作用；而濃度為10ng/ml的外源性TGF-β1對加入到接種于模擬體內(nèi)種植體的鈦片表面的成骨細(xì)胞中的骨鈣素(osteocalcin，OC)，骨涎蛋白(bonesialoprotein，BSP)和Ⅰ型膠原蛋白(collagen-Ⅰ，COL-Ⅰ)的表達(dá)有一定的抑制作用。本實(shí)驗(yàn)選取了骨鈣素(osteocalcin，OC)，骨涎蛋白(bonesialoprotein，

8、BSP)和Ⅰ型膠原蛋白(collagen-Ⅰ，COL-Ⅰ)三種礦化蛋白，通過體外構(gòu)建的成骨細(xì)胞模型，利用RT-PCR的方法檢測不同濃度TGF-β1刺激前后不同培養(yǎng)時間點(diǎn)成骨細(xì)胞中OC、BSP和COL-Ⅰ的表達(dá)變化。所構(gòu)建的體外成骨細(xì)胞模型很好地模擬了體內(nèi)種植體的成骨環(huán)境。模擬體內(nèi)種植體的鈦片與成骨細(xì)胞有良好的組織相容性，可以作為臨床種植體與成骨細(xì)胞相結(jié)合的依據(jù)。特定濃度TGF-β1可以影響種植體表面成骨細(xì)胞的增殖和分化。低濃度TGF-β