腫瘤壞死因子-α、白介素-8和轉(zhuǎn)化生長因子-β-,1-對人胸膜間皮細(xì)胞表達(dá)水通道蛋白1的影響.pdf

1、本研究從病人漏出性胸腔積液中分離培養(yǎng)人胸膜間皮細(xì)胞,經(jīng)過免疫組織化學(xué)鑒定后,用MTT法研究腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白介素8(IL-8)和轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β<,1>)對體外培養(yǎng)的人胸膜間皮細(xì)胞的損傷作用的量效關(guān)系;用免疫印跡技術(shù)(Western blot)方法探討AQP<,1>的表達(dá),并研究在TNF-α、IL-8和TGF-β作用下,培養(yǎng)人胸膜間皮細(xì)胞表達(dá)AQP<,1>的時相變化.從而為了解炎癥因子和AQP分子表達(dá)的關(guān)系,加深對

2、炎癥胸腔積液機(jī)制的認(rèn)識,并為開發(fā)控制胸腔積液的藥物提供理論基礎(chǔ).方法和結(jié)果:一.體外培養(yǎng)人胸膜間皮細(xì)胞的鑒定.在倒置相差顯微鏡下,體外培養(yǎng)的人胸膜間皮細(xì)胞呈圓形、橢圓形、多邊形等,細(xì)胞生長融合后呈典型的卵石樣或鋪路石樣.細(xì)胞免疫熒光化學(xué)檢測顯示:體外培養(yǎng)的人胸膜間皮細(xì)胞呈抗細(xì)胞角蛋白抗原陽性,抗波形蛋白抗原陽性,抗Ⅷ因子相關(guān)抗原陰性,符合人胸膜間皮細(xì)胞的特征.二.TNF-α、IL-8和TGF-β<,1>對體外培養(yǎng)的人胸膜間皮細(xì)胞存活率的

3、影響的量效關(guān)系.在10<'-8>~10<'-4>g/ml濃度范圍內(nèi),TNF-α、IL-8和TGF-β<,1>對體外培養(yǎng)的人胸膜間皮細(xì)胞存活有劑量依賴性抑制作用.其中,以TNF-α的量效曲線的斜率最大,IL-8的量效曲線的斜率最小.TNF-α抑制培養(yǎng)人胸膜間皮細(xì)胞的量效關(guān)系的回歸方程為:y=79.56-8.50x,r=0.9568,n=15;IL-8抑制培養(yǎng)人胸膜間皮細(xì)胞的量效關(guān)系的回歸方程為:y=96.86-4.081x,r=0.912

4、4,n=15;TGF-β<,1>抑制培養(yǎng)人胸膜間皮細(xì)胞的量效關(guān)系的回歸方程為:y=78.00-7.239x,r=0.9764,n=15.【y為培養(yǎng)的人胸膜間皮細(xì)胞存活率﹪,x為細(xì)胞因子濃度(ng/ml)的對數(shù)值】三.培養(yǎng)的人胸膜間皮細(xì)胞有AQP<,1>表達(dá).Western blot顯示:AQP<,1>在SDS凝膠中的遷移率相當(dāng)于分子質(zhì)量28kD(AQP<,1>的分子質(zhì)量).與同等量上樣蛋白的人胚腎細(xì)胞相比,人胸膜間皮細(xì)胞的AQP<,1>

5、表達(dá)量低于人胚腎細(xì)胞.四.炎癥細(xì)胞因子TNF-α、IL-8和TGF-β<,1>增強(qiáng)培養(yǎng)人胸膜間皮細(xì)胞AQP<,1>表達(dá)的時-效關(guān)系Western blot顯示:在加入TNF-α、TGF-β<,1>或IL-8 0.5h人胸膜間皮細(xì)胞上AQP<,1>的表達(dá)即增加.此后加入TNF-α組的人胸膜間皮細(xì)胞上AQP<,1>的表達(dá)繼續(xù)增加,6h達(dá)到峰值;而加入TGF-β<,1>或IL-8組的人胸膜間皮細(xì)胞上AQP<,1>的表達(dá)均有所回降,其后再次增加

6、,在48h達(dá)到第二個更高的峰值.結(jié)論:1.人胸膜間皮細(xì)胞有AQP<,1>表達(dá),與同等量上樣蛋白的人胚腎細(xì)胞相比,人胸膜間皮細(xì)胞的AQP<,1>表達(dá)低于人胚腎細(xì)胞.2.炎癥細(xì)胞因子TNF-α、IL-8和TGF-β<,1>對培養(yǎng)的人胸膜間皮細(xì)胞存活有劑量依賴性的抑制作用,其中,以TNF-α的量效曲線的斜率最大,IL-8的量效曲線的斜率最小.3.炎癥細(xì)胞因子TNF-α、IL-8和TGF-β<,1>可上調(diào)人胸膜間皮細(xì)胞AQP<,1>的表達(dá).4.