2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、標(biāo)記免疫分析技術(shù)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),已被廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床各個領(lǐng)域。近年來,由于新原理、新技術(shù)的不斷應(yīng)用,標(biāo)記免疫技術(shù)得到了長足的發(fā)展。最常用的標(biāo)記免疫分析技術(shù)是放射免疫分析(Radioimmunoassay,RIA)和酶免疫分析(Enzymatic immunoassay,EIA),但RIA和EIA在應(yīng)用中也存在著一些缺陷:RIA的放射性核素污染、標(biāo)記物的貨價期短;EIA酶的活性容易失活,導(dǎo)致EIA的靈敏度不高,酶的大

2、分子標(biāo)記容易影響被標(biāo)記物的空間結(jié)構(gòu),使得EIA靈敏度的提高受到限制。而用普通熒光分子作為標(biāo)記物容易受到散射光、樣品的背景熒光和熒光淬滅等諸多因素的干擾,導(dǎo)致分析的靈敏度低,很難適應(yīng)微量抗原抗體檢測的需要。20世紀(jì)80年代初發(fā)展起來的時間分辨熒光免疫分析(Time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)技術(shù),克服了放射免疫分析的同位素污染、半衰期短及酶免疫分析方法穩(wěn)定性差等缺點(diǎn),具有快速、靈敏、穩(wěn)定等特點(diǎn),并廣

3、泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究和臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)。 丙型肝炎病毒抗體(anti-HCV)是機(jī)體感染丙肝病毒后產(chǎn)生的針對丙肝病毒的抗體,不具有保護(hù)性,目前在醫(yī)院和血液系統(tǒng)廣泛使用的檢測方法為酶免疫分析法,但酶免法靈敏度較低,易造成漏檢;乙型肝炎病毒核心抗體IgM(抗HBc-IgM)是機(jī)體對HBV的感染產(chǎn)生的免疫應(yīng)答,IgM抗體陽性常表示病毒的近期感染,是HBV感染者血清中最早出現(xiàn)的特異性抗體,是HBV復(fù)制具有傳染性的標(biāo)志,目前相關(guān)的檢測方法有微

4、粒子酶免疫分析(MEIA)法、酶聯(lián)免疫法和固相放射免疫法(SPRIA),酶免法較其他兩種方法更具臨床可操作性,且不會有放射性同位素的污染,但是酶免法本身也存在靈敏度不夠高、酶標(biāo)記物不穩(wěn)定的缺點(diǎn);乙型肝炎病毒前S1抗原(HBV-preS1Ag)是乙肝病毒基因組S基因區(qū)中preS1基因編碼的產(chǎn)物,在急性乙型肝炎中,疾病早期轉(zhuǎn)氨酶升高前即可檢測出前S1抗原,也可作為乙肝病毒感染的早期診斷指標(biāo)。若preS1先于HBV-DNA陰轉(zhuǎn)是病毒清除的最早

5、跡象,提示疾病的預(yù)后良好,反之preS1抗原持續(xù)陽性,將發(fā)展至慢性肝炎。檢測抗HBc-IgM和HBV-preS1Ag是對診斷急性乙型肝炎的補(bǔ)充和加強(qiáng),因此他們已成為臨床上除了乙肝五項(xiàng)之外的常規(guī)檢查項(xiàng)目。 本研究主要是運(yùn)用時間分辨熒光免疫分析技術(shù)依次采用間接法、捕獲法和雙抗體夾心法研制丙型肝炎病毒抗體、乙肝病毒核心抗體IgM和乙肝病毒前S1抗原的診斷試劑,評價試劑的各項(xiàng)性能指標(biāo)包括:準(zhǔn)確性及靈敏度、cutoff值的確定、特異性、精

6、密度、穩(wěn)定性,并與國內(nèi)同類的ELISA診斷試劑進(jìn)行比較,評價其應(yīng)用于臨床檢測的可行性。研究結(jié)果顯示(1)抗-HCV-TRFIA試劑盒的準(zhǔn)確性及靈敏度均符合抗HCV試劑國家標(biāo)準(zhǔn)品所規(guī)定的要求;cutoff值為陰性對照熒光值×2.1;與抗HBs、抗HBe、抗HBc、梅毒螺旋體抗體、HIV(1+2)抗體國家標(biāo)準(zhǔn)品中的精密度參考品無交叉反應(yīng),特異性較好;試劑盒分析內(nèi)變異系數(shù)為3.2%-9.3%,分析間變異系數(shù)為4.6%-8.9%;試劑放置于37

7、℃7天或者4℃一年,檢測熒光值無明顯下降且分析內(nèi)CV<10%,分析間CV<15%,穩(wěn)定性較好;檢測樣本不受甘油三酯、膽紅素、血紅蛋白的干擾;測定508份臨床血清標(biāo)本與國內(nèi)同類試劑比較,自制試劑優(yōu)于酶免試劑且靈敏度更高。(2)抗HBc-IgM TRFIA試劑盒的cutoff值為陰性對照熒光值×2.5;與抗-HBs,抗-HBc-IgG,抗-HBe抗體無交叉反應(yīng);分析內(nèi)及分析間變異系數(shù)均小于10%;試劑可在4℃穩(wěn)定一年,37℃穩(wěn)定7天,分析內(nèi)

8、及分析間CV仍低于10%;檢測樣本不受甘油三酯、膽紅素、血紅蛋白的干擾;測定584份臨床血清標(biāo)本與國內(nèi)同類試劑比較,自制試劑優(yōu)于酶免試劑且特異性更高。(3)HBV-preS1Ag TRFIA試劑盒的cutoff值為陰性對照熒光值×2.5;與用正常人血清稀釋的HBsAg和HBeAg無交叉反應(yīng);試劑盒分析內(nèi)變異系數(shù)為3.2%~8.3%,分析間變異系數(shù)為5.1%~10.9%;試劑放置于37℃7天或者4℃一年,分析內(nèi)CV<10%,分析間CV<1

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