糖尿病自身抗體免疫滲濾聯(lián)檢試劑盒的研制及初步應(yīng)用.pdf

1、背景:
　　糖尿病是一種多因素引起的復(fù)雜的代謝性疾病,發(fā)病率高、危害大,其中1型糖尿病和2型糖尿病是兩個主要類型,因二者發(fā)病機制和治療措施不同,目前糖尿病防治指南規(guī)定需予區(qū)分。1型糖尿病主要是由自身免疫性破壞胰島P細(xì)胞導(dǎo)致胰島素絕對缺乏而引起,其特征之一表現(xiàn)為外周血中出現(xiàn)針對胰島卩細(xì)胞相關(guān)分子的自身抗體,這些自身抗體作為檢測標(biāo)志物,為糖尿病分型診斷提供了一個有效的解決途徑。目前臨床常用的胰島素自身抗體(IA A)、谷氨酸脫羧酶自身

2、抗體(GADA)、蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗體(IA-2 A)在1型糖尿病中的陽性情況、持續(xù)時間和存在強度各具特點,單個指標(biāo)的診斷價值尚存在缺陷。近年來新發(fā)現(xiàn)的鋅轉(zhuǎn)運體8自身抗體(ZnT8A)具有較好的檢測敏感性和特異性,聯(lián)合檢測IAA、GADA、IA-2A、ZnT8A能夠使不同的自身抗體優(yōu)勢互補,綜合提高診斷效能。但常見的放射配體法和酶聯(lián)免疫法主要對應(yīng)單個項目的測定,以微孔板為反應(yīng)載體存在板間差異和孔間差異問題,難以達(dá)到在同一條件下同時檢

3、測四項指標(biāo),導(dǎo)致聯(lián)合檢測成本高、耗時長、操作復(fù)雜、差異難控制等問題,使得該工作在臨床開展受限。
　　目的:
　　以固相膜免疫反應(yīng)原理為基礎(chǔ),建立糖尿病自身抗體斑點金免疫滲濾檢測法,構(gòu)建聯(lián)合檢測IAA、GADA、IA-2A、ZnT8A的血清學(xué)診斷試劑盒,使四項指標(biāo)能夠在同一條件下一次同時完成檢測,有效減少檢測差異并提高檢測效率,為糖尿病自身抗體聯(lián)合檢測提供一種快速簡便、準(zhǔn)確高效且價廉易推廣的新途徑。
　　方法:
　

4、　制備膠體金并標(biāo)記鏈霉親和素作為顯色探針,將重組人胰島素、谷氨酸脫羧酶、蛋白酪氨酸磷酸酶和鋅轉(zhuǎn)運體8抗原點樣于硝酸纖維素膜上,設(shè)計生物素-鏈霉親和素級聯(lián)信號放大反應(yīng)體系,探索并確定最優(yōu)檢測條件,建立糖尿病自身抗體斑點金免疫滲濾檢測法。將免疫滲濾裝置和配套試劑組成免疫滲濾聯(lián)檢試劑盒,初步應(yīng)用于檢測臨床病例和健康對照標(biāo)本,評估試劑盒性能。
　　結(jié)果:
　　1、自制的18nm膠體金經(jīng)透射電鏡鑒定具有良好分散性和均一性,以其成功標(biāo)記

5、鏈霉親和素并獲得高速離心純化。
　　2、篩選確定了斑點金免疫滲濾法檢測IAA、GADA、IA-2A、ZnT8A的最適反應(yīng)條件,構(gòu)建完成了免疫滲濾聯(lián)檢試劑盒并優(yōu)化其制備工藝。
　　3、應(yīng)用本試劑盒檢測42例 T1DM敏感性為66.7％,檢測100例健康對照特異性為97%。與E L IS A法比較在自身抗體陽性檢出率上無顯著差異(P>0.05)。采用3個批次的試劑盒檢測結(jié)果一致,4°C干燥保存10周內(nèi)檢測性能穩(wěn)定。
　　結(jié)