別構(gòu)調(diào)節(jié)sigma-1受體在小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)炎癥中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　研究sigma-1受體別構(gòu)調(diào)節(jié)劑SKF83959對脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)介導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)的抗炎作用以及炎癥介質(zhì)釋放所引起的神經(jīng)毒性的保護(hù)作用，并進(jìn)一步探討SKF83959抗炎作用的分子機(jī)制。
　　方法：
　　利用LPS刺激的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞，MTT法檢測細(xì)胞活性；收集BV2細(xì)胞培養(yǎng)液上清，分別用 Griess法和 ELISA法檢測一氧化氮（NO）和腫瘤壞死因子（TNF

2、-α）的含量；收集BV2細(xì)胞超聲破碎后進(jìn)行蛋白定量，用ELISA法檢測細(xì)胞內(nèi)DHEA的含量；Quantitative real-time PCR(Q-PCR)方法檢測炎癥介質(zhì)TNF-α、IL-1β和iNOS的mRNA表達(dá)水平；Western Blot方法檢測iNOS蛋白的表達(dá)以及MAPKs和IKK/IκBα蛋白磷酸化水平；收集細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）的水平；用放射性配基結(jié)合實驗測定SKF83959對脫氫表雄酮（dehy

3、droepiandrosterone，DHEA）與sigma-1受體結(jié)合能力的影響；BV2小膠質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)基與HT-22海馬神經(jīng)元細(xì)胞共培養(yǎng)，收集細(xì)胞，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測神經(jīng)元細(xì)胞凋亡水平，研究SKF83959對LPS介導(dǎo)的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥介質(zhì)引起的神經(jīng)毒性的保護(hù)作用。
　　結(jié)果：
　　SKF83959顯著抑制LPS激活的BV2小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)，但被sigma-1受體拮抗劑BD1047和BD1063以及DHEA合成抑

4、制劑酮康唑阻斷；SKF83959促進(jìn)了DHEA與sigma-1受體結(jié)合，并以正向協(xié)同的方式增強(qiáng)了外源性DHEA的抗炎作用；Sigma-1受體拮抗劑BD1047和BD1063也阻斷了SKF83959和DHEA的協(xié)同抗炎作用；在小膠質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)實驗中，SKF83959可以改善小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥介質(zhì)對HT-22神經(jīng)元細(xì)胞的神經(jīng)毒性；SKF83959的抗炎作用與MAPK/ERK和NFκB信號通路激活以及D1受體活化并不相關(guān)。
　　結(jié)論：