別構(gòu)調(diào)節(jié)sigma-機(jī)1受體的抗抑郁作用及其制研究.pdf

1、本文對(duì)別構(gòu)調(diào)節(jié)sigma-機(jī)1受體的抗抑郁作用及其制進(jìn)行了研究。本研究分為兩個(gè)部分：
　　第一部分：SOMCL-668具有別構(gòu)調(diào)節(jié)sigma-1受體的活性。
　　目的：Sigma-1受體在抑郁癥等眾多神經(jīng)精神疾病治療中有重要作用，同時(shí)，別構(gòu)調(diào)節(jié)是調(diào)節(jié)受體功能重要途徑之一。因此，別構(gòu)調(diào)節(jié)sigma-1可能成為抑郁癥治療的新靶點(diǎn)。前期競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)表明，新型化合物3-methyl-phenyl-2,3,4,5-tetrahydro

2、-1H-benzo[d]azepin-7-ol(SOMCL-668)能以別構(gòu)調(diào)節(jié)的方式促進(jìn)sigma-1受體特異性激動(dòng)劑3H-(+)-pentazocine與sigma-1受體的結(jié)合。在此研究基礎(chǔ)上，本部分將從生物學(xué)功能角度進(jìn)一步證實(shí)SOMCL-668的別構(gòu)調(diào)節(jié)功能，從而為研究別構(gòu)調(diào)節(jié)sigma-1受體的作用提供有力支持。
　　方法：培養(yǎng) HT22小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞系，采用細(xì)胞免疫熒光法，檢測(cè)SOMCL-668單獨(dú)或聯(lián)用sigma

3、-1受體激動(dòng)劑(+)SKF-10047對(duì)sigma-1受體與Bip(binding immunoglobulin protein)蛋白共定位的影響；采用免疫共沉淀方法，檢測(cè)SOMCL-668單獨(dú)或聯(lián)用sigma-1受體激動(dòng)劑(+)SKF-10047對(duì)sigma-1受體與Bip結(jié)合情況的影響；分離細(xì)胞膜成分，檢測(cè)SOMCL-668單獨(dú)或聯(lián)用sigma-1受體激動(dòng)劑(+)SKF-10047對(duì)sigma-1受體轉(zhuǎn)位現(xiàn)象的影響；培養(yǎng)原代神經(jīng)元，

4、檢測(cè)SOMCL-668單獨(dú)或聯(lián)用sigma-1受體激動(dòng)劑(+)SKF-10047對(duì)神經(jīng)元神經(jīng)突起生長(zhǎng)以及BDNF(brain-derived neurotrophic factor,腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子)分泌的影響。
　　結(jié)果：SOMCL-668本身不能改變sigma-1受體和Bip的共定位或結(jié)合，但是可以明顯促進(jìn)激動(dòng)劑誘導(dǎo)的sigma-1受體與Bip的分離；同時(shí)，SOMCL-668單獨(dú)不能，但聯(lián)用激動(dòng)劑后顯著增加sigma-1受體

5、向細(xì)胞膜的轉(zhuǎn)位；此外，SOMCL-668自身不具備，但是可以顯著增加激動(dòng)劑誘導(dǎo)的神經(jīng)突起生長(zhǎng)和BDNF分泌的能力。
　　結(jié)論：SOMCL-668具備別構(gòu)調(diào)節(jié)sigma-1受體的活性，是一種新型的sigma-1受體別構(gòu)調(diào)節(jié)劑。
　　第二部分：別構(gòu)調(diào)節(jié)sigma-1受體具有抗抑郁作用。
　　目的：本部分將以SOMCL-668為工具，重點(diǎn)考察別構(gòu)調(diào)節(jié)sigma-1受體是否產(chǎn)生抗抑郁作用，并探討其可能的抗抑郁作用機(jī)制。

6、　　方法：⑴采用小鼠強(qiáng)迫游泳、懸尾實(shí)驗(yàn)等急性抗抑郁藥物篩選模型初步探討SOMCL-668的抗抑郁作用；⑵采用慢性不可預(yù)知性溫和刺激制作抑郁癥模型，糖水偏好、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)等檢測(cè) SOMCL-668的抗抑郁作用；免疫印跡法檢測(cè) SOMCL-668對(duì)抑郁癥中BDNF-GSK3β(glycogen synthase kinase3β,糖原合成激酶3β)通路的影響變化；⑶采用免疫印跡法，同時(shí)應(yīng)用藥理學(xué)及分子生物學(xué)手段檢測(cè)sigma-1受體對(duì)GSK3β

7、活性的抑制作用及其調(diào)控機(jī)制；⑷采用免疫印跡法，從動(dòng)物及細(xì)胞水平觀察SOMCL-668對(duì)GSK3β活性的抑制作用；采用藥理學(xué)手段間接激活GSK3β，考察GSK3β在SOMCL-668的抗抑郁效應(yīng)中的作用。
　　結(jié)果：①SOMCL-668可以減少?gòu)?qiáng)迫游泳、懸尾實(shí)驗(yàn)中小鼠不動(dòng)時(shí)間，表現(xiàn)出抗抑郁作用，提前給以sigma-1受體拮抗劑BD1047則取消其抗抑郁作用；②SOMCL-668可以改善抑郁癥模型中小鼠快感缺乏、焦慮及體重下降等癥狀，

8、同時(shí)可以緩解抑郁癥導(dǎo)致的BDNF及GSK3β(ser-9)磷酸化水平的下調(diào)，并且SOMCL-668抗抑郁起效時(shí)間(1周內(nèi))優(yōu)于現(xiàn)有抗抑郁藥物文拉法辛。③給予sigma-1受體激動(dòng)劑或過(guò)表達(dá)sigma-1受體均能增加GSK3β(ser-9)磷酸化水平(即抑制其活性)，且Trk B受體抑制劑、AKT通路抑制劑可以拮抗sigma-1受體對(duì)GSK3β(ser-9)磷酸化的影響。結(jié)果證實(shí)sigma-1受體可以調(diào)控GSK3β活性。④在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，S

9、OMCL-668可以快速增加小鼠海馬中GSK3β(ser-9)磷酸化水平，sigma-1受體拮抗劑BD1047則阻斷這種作用；在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，SOMCL-668可以通過(guò)別構(gòu)調(diào)節(jié)的方式增加HT22細(xì)胞中GSK3β(ser-9)磷酸化水平，siRNA沉默 sigma-1受體表達(dá)后同樣取消這種作用。藥理學(xué)激活 GSK3β可以阻斷SOMCL-668在強(qiáng)迫游泳及懸尾實(shí)驗(yàn)中的抗抑郁作用。
　　結(jié)論：sigma-1受體別構(gòu)調(diào)節(jié)劑SOMCL-668