PCT膠體金層析法檢測嗜異性抗體的干擾及其清潔抗體的篩選.pdf

1、目的:調(diào)查嗜異性抗體在不同疾病人群中的分布并結合相應的疾病臨床診斷，探討它們之間可能存在的關聯(lián)性。針對嗜異性抗體干擾機制，篩選出合適的清潔抗體，并為其今后應用于診斷試劑中提供實驗依據(jù)。
　　方法:1）PCT膠體金免疫層析試紙條的制備。本研究購買商品化膠體金溶液，對膠體金標抗體最佳pH值，膠體金標記抗體最佳蛋白加入量進行了探索。然后然后制成膠體金標記抗PCT單克隆抗體1溶液。用上述金標抗體溶液涂布于玻璃纖維膜上，制成膠體金墊。再用玻

2、璃纖維膜制作樣品墊。包被阻斷劑HBR-1時，將樣品墊浸泡至相應樣品墊處理液。將處理好的樣品墊、NC膜等依次疊放在PVC板上，組裝成PCT試紙條。2）血清樣本PCT試紙條檢測。收集病人血清樣本1129份，健康人血清樣本400份。取90μl加樣于上述制作好的PCT試紙條樣品墊上。檢測并比較包被阻斷劑組和不包被阻斷劑組所得結果。3）清潔抗體篩選。將PCT試紙條樣品墊依次包被9種不同的鼠源性IgG，另外附加包被HBR-1的陽性對照組及不包被阻斷

3、劑的陰性對照組。將所確認的嗜異性抗體陽性血清樣本，依次用所改造過的PCT試紙條檢測。4）臨床反應性的驗證。使用樣品墊上包被待定清潔抗體的PCT試紙條和空白對照PCT試紙條檢測之前收集的血清樣本PCT陽性率的變化。進一步驗證臨床反應性時，另取218份血清樣本，分別用樣品墊上包被所要驗證的清潔抗體的PCT試紙條、樣品墊上包被阻斷劑HBR-1的PCT試紙條，最后用PCT-Q定量試劑盒檢測。
　　結果;1）膠體金標記PCT抗體1的最佳pH

4、等于8。理論上，最佳抗體加入量為8μ g/ml。實際加入量在此基礎上多加20％～30％，為10μg/ml。按順序組裝后所制作的PCT免疫層析試紙條具有良好的靈敏性、穩(wěn)定性。2）血清樣本PCT試紙條陽性結果樣本總數(shù)為198份、真陽性數(shù)為53份、假陽性數(shù)為115份，從而得出嗜異性抗體干擾率為10.4％。將人群按疾病的相應臨床診斷分類，發(fā)現(xiàn)自身免疫病患者體內(nèi)嗜異性抗體含量較高，達13.5％。妊娠期婦女體內(nèi)含量較低，其他疾病患者體內(nèi)嗜異性抗體含

5、量波動在8％～9％，正常人群中嗜異性抗體含量為8.25％。3)清潔抗體篩選實驗發(fā)現(xiàn)各種候選清潔抗體阻斷效率高低不平，其中④號抗體有非常好的阻斷效率，達98.96％。與HBR-1組符合率較好，與其他組有明顯統(tǒng)計學差異，p＜0.05。4）清潔抗體的臨床反應性驗證實驗發(fā)現(xiàn)④號抗體使用后能明顯的消除嗜異性抗體干擾，④號抗體與HBR-1有極好的一致性，而且PCT試紙條各定性等級結果與PCT定量檢測數(shù)值區(qū)間有良好對應關系，證實④號抗體是PCT檢測中