HDAC6在炭黑顆粒致人支氣管上皮細胞炎癥反應中的作用.pdf

1、目的:探討組蛋白去乙?；?在炭黑顆粒誘導支氣管上皮細胞炎癥反應中的作用。
　　方法:體外培養(yǎng)人支氣管上皮細胞(16HBE)，以細胞空白為對照組，分別用12.5、25、50、100μg/ml濃度的炭黑顆粒(Printex90)染毒細胞12、24、36、48h后，采用Cell Counting Kit-8法(CCK-8)檢測細胞活力確定染毒時間。采用HDAC6siRNA預處理16HBE細胞，將實驗分為六組，細胞空白對照組、25μg/

2、ml炭黑顆粒組、50μg/ml炭黑顆粒組、HDAC6siRNA干擾空白組、25μg/ml炭黑顆粒+HDAC6siRNA干擾組、50μg/ml炭黑顆粒+HDAC6siRNA干擾組，染毒24h后，收集染毒細胞和上清液，采用RT-PCR檢測HDAC6基因mRNA相對表達水平，WB檢測細胞內(nèi)HDAC6、纖毛內(nèi)轉(zhuǎn)運蛋白IFT88和自噬體蛋白LC3-Ⅱ等蛋白表達水平，ELISA檢測細胞上清液中IL-8、IL-1β、TNF-α、IL-6、TGF-β1

3、和IL-17A等炎性細胞因子的釋放量。
　　結(jié)果:(1)在染毒各個時間點，炭黑顆粒染毒16HBE細胞后可導致細胞活力明顯下降，隨著炭黑顆粒濃度的增加，細胞存活率明顯下降，呈現(xiàn)較明顯的劑量反應關系，且隨著染毒時間的延長，16HBE細胞活力也逐漸下降。炭黑顆粒作用于16HBE細胞24h后細胞內(nèi)HDAC6mRNA相對表達水平先升高后下降，當炭黑顆粒濃度為12.5μg/ml時，細胞內(nèi)HDAC6mRNA表達水平升高，但隨著炭黑顆粒濃度的升高

4、，細胞內(nèi)HDAC6mRNA的表達水平逐漸下降，當炭黑顆粒濃度達到100μg/ml時，HDAC6mRNA表達顯著低于細胞空白對照組(P＜0.05）。但染毒后細胞內(nèi)HDAC6蛋白的表達水平隨著炭黑濃度的升高逐漸增加，當炭黑濃度為25μg/ml時，HDAC6蛋白表達水平達到最高，當炭黑顆粒濃度為100μg/ml時HDAC6蛋白表達降低至正常水平。炭黑顆粒染毒的細胞內(nèi)自噬體蛋白LC3-Ⅱ的表達水平增加，而IFT88蛋白水平呈逐漸下降趨勢，當炭黑

5、顆粒濃度在100μg/ml時，LC3-Ⅱ蛋白表達水平顯著高于細胞空白對照組(P＜0.05）;當炭黑顆粒濃度≧50μg/ml時，IFT88蛋白表達水平顯著低于細胞空白對照組(P＜005)。細胞上清液中炎性細胞因子IL-8、IL-1β、TGF-β1和IL-17A的表達水平隨著炭黑顆粒濃度的升高呈上升趨勢，當炭黑顆粒濃度≧25μg/ml時，IL-8的表達水平顯著高于細胞空白對照組(p＜0.05），當炭黑顆粒濃度≧50μg/ml時，TGF-β1

6、的表達水平顯著高于細胞空白對照組(p＜0.05)，當炭黑顆粒濃度為100μg/ml時，IL-1β和IL-17A的表達水平高于細胞空白對照組，差異具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05）;但TNF-α和IL-6的表達水平略高于細胞空白對照組，差異無統(tǒng)計學意義(P＞005)。
　　(2)與正常染毒細胞組比較，炭黑顆粒+HDAC6siRNA干擾組HDAC6mRNA表達水平顯著下降(p＜0.05）。當炭黑顆粒濃度為50μg/ml時，HDAC6siR

7、NA干擾的細胞內(nèi)IFT88蛋白水平顯著高于HDAC6siRNA干擾細胞空白組(P＜0.05）;但自噬體蛋白LC3-Ⅱ表達水平略下降。50μg/ml炭黑顆粒+HDAC6siRNA干擾組細胞釋放IL-8、IL-6和TGF-β1水平顯著升高，TNF-α顯著下降，與HDAC6siRNA干擾的細胞空白組相比，差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論:炭黑顆?？蓪е?6HBE細胞活力明顯下降，細胞內(nèi)HDAC6蛋白表達水平和纖毛自噬的水