HMGB1對支氣管上皮細(xì)胞分泌哮喘相關(guān)炎癥因子的影響及作用機制的研究.pdf

1、目的:通過體外細(xì)胞實驗，探討HMGB1是否參與調(diào)節(jié)支氣管上皮細(xì)胞(16-HBE)分泌哮喘相關(guān)炎癥因子的病理生理過程，并進一步探討HMGB1參與上述調(diào)控過程的機制。
　　方法:選取16-HBE細(xì)胞株進行體外培養(yǎng)，(1)、細(xì)胞分組:對照組、HMGB1-100ng/ml、HMGB1-500ng/ml、HMGB1-2000ng/ml，提取上述四組實驗細(xì)胞的mRNA(24h)、細(xì)胞培養(yǎng)上清(48h)以及細(xì)胞裂解液(48h)，qPCR和ELI

2、SA檢測上述樣品中TSLP、IL-8、IL-6、EGF、VEGF、MMP-9、IL-1β、TNF-α炎癥因子mRNA及分泌量水平;qPCR和Western blot檢測上述細(xì)胞分組中RAGE、TLR2、TLR4 mRNA及蛋白表達水平;(2)分別使用拮抗RAGE（20μg/ml）、TLR2(20μg/ml)、TLR4(20μg/ml)的抗體后，用ELISA檢測TSLP、IL-8、IL-6、EGF、VEGF、MMP-9、IL-1β、TNF

3、-α的表達變化。(3)、分別用SB202190(10μM)、U0126(10μM)、LY294002(10μM)抑制p38 MAPK、ERK1/2、PI3K通路后，Western blot檢測細(xì)胞裂解液中p38、ERK1/2和PI3K蛋白磷酸化情況， ELISA檢測細(xì)胞上清液中TSLP、IL-8、IL-6、EGF、VEGF、MMP-9、IL-1β、TNF-α分泌量的變化。
　　結(jié)果:(1)、HMGB1可增加16-HBE TNF-α

4、、TSLP、MMP-9、VEGF的表達和釋放。相對于對照組，HMGB1-500g/ml可明顯增加16-HBE TNF-α、TSLP、MMP-9、VEGF的mRNA表達和蛋白的釋放(P＜0.05)，HMGB1-2000g/ml可進一步增加上述炎癥因子的表達和釋放，相對于HMGB1-500ngml有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。HMGB1不能增加EGF、IL-6、IL-8、IL-1β的表達和釋放(P＞0.05)。(2)、HMGB1可增加16-

5、HBE RAGE的表達。相對于對照組，HMGB1-500g/ml明顯增加RAGE的mRNA及蛋白的表達(P＜0.05)，HMGB1-2000g/ml可進一步增加RAGE的mRNA及蛋白的表達，相對于HMGB1-500ngml有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。(3)、HMGB1可激活16-HBE細(xì)胞的p38 MAPK、ERK1/2通路。使用通道抑制劑后，相對于HMGB1干預(yù)組，抑制p38 MAPK（減少約45％～60％）比抑制ERK1/2(減