脫細胞真皮基質(zhì)軟組織增量效果及轉(zhuǎn)歸的初步研究.pdf

1、脫細胞真皮基質(zhì)作為近年來國內(nèi)外新興起的一種組織替代物，本課題組通過初步顆?；瑺蠲摷毎嫫せ|(zhì)后，分別將顆粒狀脫細胞真皮基質(zhì)、片狀脫細胞真皮基質(zhì)和透明質(zhì)酸鈉凝膠作為軟組織填充材料，在動物體內(nèi)建立軟組織增量模型，探究顆粒狀脫細胞真皮基質(zhì)與片狀脫細胞真皮基質(zhì)的組織增量效果和轉(zhuǎn)歸機制，為進一步細化顆粒狀脫細胞真皮基質(zhì)乃至制成注射型的脫細胞真皮基質(zhì)打下基礎(chǔ)，以期為臨床提供更理想的軟組織填充材料。
　　目的:
　　本實驗將顆粒狀脫細胞

2、真皮基質(zhì)、片狀脫細胞真皮基質(zhì)和透明質(zhì)酸鈉凝膠作為軟組織填充材料，通過在動物體內(nèi)建立軟組織增量模型，從組織增量的體積和高度來初步探究3種不同材料的組織增量效果;初步研究填充材料的轉(zhuǎn)歸機制;以探討進一步細化顆粒狀脫細胞真皮基質(zhì)乃至制成注射型的脫細胞真皮基質(zhì)的可行性。
　　方法:
　　1.在兔耳上分別注射透明質(zhì)酸鈉凝膠0.05 ml、0.10 ml、0.15 ml，每組6個樣本，用三維輪廓掃描儀掃描建模后測量注射區(qū)軟組織增量的體積

3、;在-20℃環(huán)境中使用OCT包埋劑包埋標本，切片直至達到兔耳注射區(qū)最高點，并在注射區(qū)的矢狀剖面上使用游標卡尺測量記錄注射區(qū)域組織的高度。
　　2.大小約1.0 cm×1.0 cm×1mm的片狀脫細胞真皮基質(zhì)（海奧口腔修復(fù)膜）修剪成1 mm×1 mm×1 mm大小的顆粒狀，在兔耳移植區(qū)域作一長約1.0 cm的橫行切口，在兔耳表皮與軟骨之間潛行分離出一個大小約為1.0 cm×1.0cm的皮下袋，在兔耳上移植經(jīng)生理鹽水液化的顆粒狀脫細胞

4、真皮基質(zhì)、片狀脫細胞真皮基質(zhì)，記錄為顆粒狀脫細胞真皮基質(zhì)組和片狀脫細胞組真皮基質(zhì)組，分別在移植后1周、2周、1月、3月、6月、9月收獲標本，每組每個時間段6個樣本;在兔耳上注射透明質(zhì)酸鈉凝膠（潤百顏）0.10 ml，記錄為透明質(zhì)酸鈉凝膠組，在術(shù)后的1周、2周、1月、3月、6月收獲標本，透明質(zhì)酸鈉凝膠組每個時間段6個樣本;在6只兔耳中選擇6個空白區(qū)域，作為空白組。3個處理組的所有兔耳標本采用三維輪廓掃描儀掃描建模后測量移植區(qū)軟組織增量的體

5、積。3個處理組每個時間點隨機選擇4個標本進行Micro-CT掃描，進行三維重建后測量移植區(qū)軟組織增量的體積。使用SPSS20.0統(tǒng)計分析軟件比較分析不同處理組（顆粒狀脫細胞真皮組、片狀脫細胞真皮基質(zhì)組和透明質(zhì)酸鈉凝膠組）在移植后不同時間段移植區(qū)域軟組織增量體積。
　　結(jié)果:
　　注射量0.05 ml、0.10 ml、0.15 ml的樣本軟組織增量體積分別為(57.277±9.772) mm3、(106.785±10.568)

6、 mm3、(129.686±28.896) mm3,3組注射區(qū)域的組織增量分別與各自的注射量體積相互比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P=0.128＞0.05;P=0.177＞0.05;P=0.146＞0.05)。移植區(qū)域組織高度分別為(2.300±0.182)mm、（2.797±0.279)mm、(2.890±0.411) mm。0.05 ml組的組織高度低于0.10 ml組和0.15 ml組(P=0.001＜0.05;P=0.000＜0.0

7、5)，注射量由0.05 ml增加到0.10 ml時，組織高度隨注射量的增加而增加;0.10 ml組與0.15 ml組相互比較，顯示組織增量的高度差異無統(tǒng)計學意義(P=0.441＞0.05)，提示注射量由0.10 ml增加到0.15 ml時，組織增量高度并沒有發(fā)生明顯變化。
　　顆粒狀、片狀脫細胞真皮基質(zhì)組和透明質(zhì)酸鈉凝膠組在各個時間段的兔耳移植術(shù)區(qū)均未見明顯感染、壞死，各個實驗動物術(shù)后一般情況良好，飲食、排便等活動正常，未見明顯不

8、適。顆粒狀脫細胞真皮基質(zhì)移植組、片狀脫細胞真皮基質(zhì)移植組在術(shù)后9月移植區(qū)域軟組織增量效果不明顯，三維輪廓掃描儀和Micro-CT掃描儀無法獲得該區(qū)域軟組織增量。
　　HE染色后在移植后的1周和2周，顆粒狀脫細胞真皮基質(zhì)組、片狀脫細胞真皮基質(zhì)組和透明質(zhì)酸鈉凝膠組中大量的紅細胞和炎癥細胞浸潤，有功能活躍的成纖維細胞長入移植區(qū)域內(nèi)。在移植后期顆粒狀脫細胞真皮基質(zhì)組和片狀脫細胞真皮基質(zhì)組中原有的填充材料隨著時間逐漸吸收完全，移植區(qū)域組織改

9、建成與宿主周圍組織一致的結(jié)構(gòu)。在透明質(zhì)酸鈉凝膠組中，填充材料和新生的纖維形成暫時的支架，供細胞爬行生長，隨著時間延長，支架結(jié)構(gòu)逐漸崩解。
　　Masson染色結(jié)果:顆粒狀脫細胞真皮基質(zhì)組、片狀脫細胞真皮基質(zhì)和透明質(zhì)酸鈉凝膠組在移植區(qū)域均可見新生纖維長入，并且隨著移植時間的推移，纖維數(shù)量增加。在顆粒狀脫細胞真皮基質(zhì)組和片狀脫細胞真皮基質(zhì)組中，新生的纖維主要是逐漸包繞、替代填充物，早期的纖維排列較為紊亂，后期纖維排列結(jié)構(gòu)整齊、致密;在

10、透明質(zhì)酸鈉凝膠組，新生的纖維長入，形成支架供細胞爬行生長，隨著時間推移，纖維支架結(jié)構(gòu)逐漸崩解。
　　天狼星紅染色后偏振光顯微鏡下，Ⅰ型膠原纖維呈紅色、橙黃色或黃色;Ⅲ型膠原纖維呈綠色，非膠原纖維處呈黑色。各個處理組切片視野中紅黃色面積與綠色面積隨著時間發(fā)生規(guī)律性變化。顆粒狀脫細胞真皮基質(zhì)組，在移植術(shù)后的早期，綠色的Ⅲ型膠原纖維逐漸增多，Ⅲ型膠原纖維主要分布在填充材料的顆粒與顆粒之間，從微粒四周向中央長入，隨后Ⅲ型膠原纖維開始減少，

11、紅色的Ⅰ型膠原纖維數(shù)量增多，在6月和9月時移植區(qū)域內(nèi)紅色的Ⅰ型膠原纖維為主要的膠原纖維，膠原纖維與兔耳周圍組織的纖維排列方式相似。在片狀脫細胞真皮基質(zhì)組，在移植術(shù)后的早期，綠色的Ⅲ型膠原纖維最開始主要分布于片狀填充材料的外周，在填充材料的兔耳移植區(qū)域剝離的基底面向表皮面長入，隨著時間的推移，綠色的Ⅲ型膠原纖維逐漸被紅色的Ⅰ型膠原纖維所替代。透明質(zhì)酸鈉凝膠組，在早期，新生的綠色Ⅲ型膠原纖維形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，移植時間延長，紅色的Ⅰ型膠原纖維從網(wǎng)

12、狀結(jié)構(gòu)的四周向中央逐漸增多，替代綠色的Ⅲ型膠原纖維。
　?、?Ⅲ型膠原比例變化結(jié)果:3種填充材料Ⅰ/Ⅲ型膠原比例在移植術(shù)后呈先下降后上升的趨勢，在移植術(shù)后2周Ⅰ/Ⅲ型膠原比例出現(xiàn)了最低點，在6月和9月Ⅰ/Ⅲ型膠原比例基本趨于穩(wěn)定，與正常的兔耳組織Ⅰ/Ⅲ型膠原比例相接近。移植區(qū)域膠原亞型在不同時間的規(guī)律變化符合機體創(chuàng)傷愈合膠原變化過程。
　　Ⅰ/Ⅲ型膠原比例比較的統(tǒng)計學結(jié)果:在6月，顆粒狀脫細胞真皮基質(zhì)組(P=0.455＞0.

13、05)，片狀脫細胞真皮基質(zhì)組(P=0.688＞0.05)，透明質(zhì)酸鈉凝膠組(P=0.339＞0.05)，與空白組Ⅰ/Ⅲ型膠原比例比較，差異無統(tǒng)計學意義。在移植術(shù)后的9月，顆粒狀脫細胞真皮基質(zhì)組(P=0.330＞0.05)，片狀脫細胞真皮基質(zhì)組(P=0.148＞0.05)，與空白組Ⅰ/Ⅲ型膠原比例比較，差異無統(tǒng)計學意義。
　　移植區(qū)域組織高度結(jié)果:從總體上看，顆粒狀脫細胞真皮基質(zhì)組、片狀脫細胞真皮基質(zhì)組和透明質(zhì)酸鈉凝膠組移植區(qū)域組織

14、高度呈遞減趨勢，在最初的1個月內(nèi)遞減速度較快，隨后高度變化趨緩，在6月、9月時組織高度逐漸與空白組接近。與移植區(qū)域組織增量體積不同，在經(jīng)歷了高度變化較大的移植早期（1個月）后，透明質(zhì)酸鈉凝膠組移植區(qū)域組織高度均值高于顆粒狀脫細胞真皮基質(zhì)組和片狀脫細胞真皮基質(zhì)。在移植術(shù)后的6月，片狀脫細胞真皮基質(zhì)組(P=0.056＞0.05)，與空白組兔耳軟骨上組織的厚度比較，差異無統(tǒng)計學意義。在移植術(shù)后的9月，顆粒狀脫細胞真皮基質(zhì)組(P=0.790＞0

15、.05)，片狀脫細胞真皮基質(zhì)組(P=0.776＞0.05)，與空白組Ⅰ/Ⅲ型膠原比例比兔耳軟骨上組織的厚度比較，差異無統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論:
　　1.應(yīng)用兔耳作為注射型軟組織填充材料研究動物模型時，0.05～0.10 ml是一個適當?shù)淖⑸淞糠秶?br>　　2.顆粒狀脫細胞真皮基質(zhì)、片狀脫細胞真皮基質(zhì)和透明質(zhì)酸鈉凝膠作為軟組織填充材料時，從移植區(qū)域組織的增量體積和高度來評價材料組織增量效果的顯著性和穩(wěn)定性時，3組材料均具有

16、良好的組織增量效果。片狀脫細胞真皮基質(zhì)通過初步顆?；?，制作成大小約為1 mm×1 mm×1 mm的顆粒狀時，在移植術(shù)后的9個月內(nèi)，顆粒狀脫細胞真皮基質(zhì)的組織增量效果能夠取得與片狀脫細胞真皮基質(zhì)移植相似的增量效果;在移植術(shù)后組織增量體積的穩(wěn)定性方面優(yōu)于透明質(zhì)酸鈉凝膠。進一步細化顆粒狀脫細胞真皮基質(zhì)乃至制成注射型的脫細胞真皮基質(zhì)，以期制作出更為理想的填充材料具有一定的可行性。
　　3.顆粒狀脫細胞真皮基質(zhì)、片狀脫細胞真皮基質(zhì)作為填充材