MRP8-14對(duì)巨噬細(xì)胞極化的影響及其作用機(jī)制.pdf

1、肺部感染是中國(guó)面臨的重大健康問題之一，給社會(huì)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。與此同時(shí)，伴隨著各種耐藥菌的不斷出現(xiàn)，使得以抗生素治療為主導(dǎo)的方案面臨著越來越大的挑戰(zhàn)，因此研究機(jī)體自身的內(nèi)在抗感染機(jī)制，將有可能為治療肺部感染提供新的思路。
　　巨噬細(xì)胞是一種極具異質(zhì)性的免疫細(xì)胞，具有表型可塑性和功能多樣性的特征。在LPS、IFN-γ等的刺激下，巨噬細(xì)胞可轉(zhuǎn)化為經(jīng)典激活型巨噬細(xì)胞(M1)，其特征表現(xiàn)為產(chǎn)生多種促炎細(xì)胞因子，如TNF-α、IL-6、

2、IFN-γ、iNOS和NO，起到殺滅病菌、抵抗病原微生物入侵以及抑制腫瘤生成的作用。在IL-4、IL-13等的刺激下巨噬細(xì)胞可轉(zhuǎn)化為選擇性激活型巨噬細(xì)胞(M2)，其特征是分泌抗炎細(xì)胞因子，如IL-4、IL-10、IL-13、TGF-β等，發(fā)揮抑制炎癥的作用，同時(shí)可在組織修復(fù)與重建、脂類代謝、過敏反應(yīng)和腫瘤的形成過程中發(fā)揮作用。
　　髓樣相關(guān)蛋白8(MRP8)和髓樣相關(guān)蛋白14(MRP14)作為損傷相關(guān)分子模式（danger-ass

3、ociated molecular patterns，DAMPs）的成員，兩者常以復(fù)合物的形式存在，當(dāng)中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞激活或壞死的時(shí)候，MRP8/14能夠被大量釋放到細(xì)胞外，參與體內(nèi)炎癥反應(yīng)及免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)，進(jìn)而影響炎癥以及感染性疾病的病理生理過程。
　　目的:
　　探討MRP8/14能否促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M1型巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化，進(jìn)而增強(qiáng)其殺菌能力;并且從信號(hào)通路的角度討論MRP8/14是否通過激活NF-κB調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞向M1型

4、轉(zhuǎn)化，使用敲基因小鼠來檢測(cè)RAGE和TLR4受體在MRP8/14調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞表型極化中的作用，從而進(jìn)一步闡明MRP8/14促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M1型轉(zhuǎn)化以及增強(qiáng)其殺菌能力的機(jī)制。
　　方法:
　　1、MRP8/14刺激后巨噬細(xì)胞的表型極化情況
　　采用流式細(xì)胞術(shù)、液相芯片技術(shù)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)巨噬細(xì)胞極化的相關(guān)代表因子的表達(dá)。
　　2、表型極化相關(guān)信號(hào)通路的鑒定。
　　2.1 Western blot檢

5、測(cè)MRP8/14刺激后JNK和STAT1的磷酸化情況以及NF-κB的活化情況。
　　2.2 采用通路的特異性抑制劑預(yù)處理巨噬細(xì)胞后，再用MRP8/14刺激巨噬細(xì)胞，檢測(cè)巨噬細(xì)胞極化相關(guān)指標(biāo)的變化情況，驗(yàn)證MRP8/14調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞表型極化的信號(hào)通路情況。
　　3、使用敲基因小鼠檢測(cè)RAGE和TLR4受體在MRP8/14調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞表型極化中的作用。
　　結(jié)果:
　　1、MRP8/14促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M1型轉(zhuǎn)化

6、>　　流式細(xì)胞術(shù)、液相芯片技術(shù)以及qPCR檢測(cè)結(jié)果顯示:MRP8/14可以顯著上調(diào)M1型巨噬細(xì)胞各代表因子的表達(dá)(p＜0.01)。
　　2、MRP8/14通過NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路介導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M1型轉(zhuǎn)化
　　2.1 Westtern blot結(jié)果顯示:MRP8/14可激活Raw264.7細(xì)胞的NF-κB和JNK通路，而對(duì)STAT1通路沒有影響。
　　2.2 采用NF-κB和JNK的特異性抑制劑預(yù)處理Raw264.7細(xì)

7、胞，再給于MRP8/14刺激。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與MRP8/14組相比，Bay11-7082+MRP8/14組能顯著降低M1的各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)的表達(dá)水平(p＜0.05)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，NF-κB參與了MRP8/14促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M1型轉(zhuǎn)化。
　　3、TLR4受體參與了MRP8/14對(duì)巨噬細(xì)胞表型極化的調(diào)節(jié)。
　　4、MRP8/14可以增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的殺菌能力。
　　結(jié)論:
　　MRP8/14通過TLR-4-NF-κB通路促