嗜酸乳桿菌對(duì)β-乳球蛋白過敏小鼠腸道菌群及其代謝的影響.pdf

1、牛乳β-乳球蛋白(β-lactoglobulin，β-Lg)過敏常引發(fā)消化系統(tǒng)變態(tài)反應(yīng)或過敏性胃腸炎，破壞腸道微生態(tài)平衡，嚴(yán)重影響嬰幼兒的身心健康和成長(zhǎng)成長(zhǎng)。最新報(bào)道表明益生菌可通過調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)促進(jìn)宿主代謝、營(yíng)養(yǎng)、免疫賦活，但有關(guān)益生菌調(diào)節(jié)腸道環(huán)境與抑制過敏的關(guān)系和其機(jī)制方面研究甚少。故本課題以前期獲得的、可有效緩解β-Lg過敏的嗜酸乳桿菌為研究對(duì)象，PCR-DGGE法監(jiān)測(cè)對(duì)照組、致敏組和不同劑量嗜酸乳桿菌組小鼠結(jié)腸糞便菌群多樣性，

2、高效液相/氣相色譜和氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)定各組小鼠腸道代謝物變化，ELISA法檢測(cè)各組小鼠血清總IgE的含量，并觀察嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量和過敏癥狀。通過分析益生菌調(diào)節(jié)腸道菌群變遷和代謝活動(dòng)與宿主健康之間的關(guān)系，為揭示益生菌緩解過敏的作用機(jī)制提供新的理論依據(jù)。
　　1.動(dòng)物模型的建立和驗(yàn)證
　　雌性BALB/c小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、β-Lg過敏組和不同濃度嗜酸乳桿菌灌胃組(n=15)。嗜酸乳桿菌組小鼠自第1天起每周3次灌胃不同濃度的菌

3、懸液（低濃度10μg/g;中濃度50μg/g;高濃度250μg/g），對(duì)照組和致敏組灌服等量的生理鹽水，共3周。β-Lg致敏組和嗜酸乳桿菌組小鼠在第7、14、21天給予腹腔注射0.01 mL/g1mg/mL的過敏原(1mL弗氏佐劑+1mL2mg/mLβ-Lg)。對(duì)照組小鼠腹腔輔以等量生理鹽水。實(shí)驗(yàn)的第23天，β-Lg口服激發(fā)(1mg/g)2次（間隔30min），評(píng)估過敏癥狀，眼球取血后進(jìn)行脫臼致死，獲取結(jié)腸糞便。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組小

4、鼠相比，β-Lg致敏組小鼠過敏癥狀顯著，且其血清總IgE含量和嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目顯著升高(P＜0.05)，提示動(dòng)物模型建立成功。而嗜酸乳桿菌可有效緩解過敏癥狀和降低過敏小鼠血清中抗體水平，且呈量效依賴性。
　　2.嗜酸乳桿菌干預(yù)對(duì)牛乳過敏小鼠腸道菌群多樣性的影響
　　對(duì)PCR-DGGE的優(yōu)勢(shì)條帶進(jìn)行測(cè)序分析，發(fā)現(xiàn)對(duì)照組的優(yōu)勢(shì)菌群為擬桿菌屬、未培養(yǎng)的擬桿菌門、厚壁菌門、類桿菌門。致敏組相比對(duì)照組，乳桿菌和雙歧桿菌的數(shù)量顯著減少，

5、梭狀芽孢桿菌數(shù)量顯著增加;而嗜酸乳桿菌能顯著調(diào)節(jié)腸道菌群的平衡（P＜0.05），且與灌服的劑量成正比。運(yùn)用Quantity One軟件對(duì)PCR-DGGE圖譜進(jìn)行分析，致敏組小鼠結(jié)腸菌群DGGE圖譜的豐富度為30±2，顯著低于對(duì)照組小鼠35.67±1.15（P＜0.05）。同時(shí)，過敏組小鼠結(jié)腸菌群的Shannon-Wiener指數(shù)和最大Shannon-Wiener指數(shù)均顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)。嗜酸乳桿菌干預(yù)能夠顯著提高腸道菌群多樣

6、性個(gè)各項(xiàng)指標(biāo)，中、高菌組和對(duì)照組無顯著差異（P＞0.05）。
　　3.嗜酸乳桿菌干預(yù)對(duì)牛乳過敏小鼠腸道代謝物的影響
　　應(yīng)用高效液相/氣相色譜和氨基酸自動(dòng)分析儀分析各組小鼠腸道代謝物的變化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，致敏組小鼠結(jié)腸糞便中乳酸含量顯著降低（P＜0.05）;短鏈脂肪酸中乙酸水平顯著上升，丙酸、丁酸、異丁酸、異戊酸水平顯著降低(P＜0.05）。而嗜酸乳桿菌干預(yù)能夠有效改善過敏腸道內(nèi)乳酸和短鏈脂肪酸的代謝。另外，主