IL-17A對(duì)系統(tǒng)性硬化病小鼠模型皮膚和肺部纖維化病變的作用.pdf

1、第一部分抗IL-17A單克隆抗體對(duì)系統(tǒng)性硬化病小鼠模型皮膚和肺部纖維化病變的作用
　　目的:
　　研究白細(xì)胞介素(IL)-17A在系統(tǒng)性硬化病(SSc)小鼠模型皮膚和肺組織中的表達(dá)，并探討抗IL-17A單克隆抗體對(duì)SSc小鼠模型纖維化病變的作用。
　　方法:
　　將24只雌性BALB/c小鼠隨機(jī)分為4組，每組6只，包括正常對(duì)照組(小鼠背部皮下注射磷酸鹽緩沖液(PBS))、模型組(小鼠背部皮下注射博來霉素(BLM)

2、)、抗體組(BLM+抗IL-17A單克隆抗體)、同型對(duì)照組(BLM+同型對(duì)照)。觀察各組小鼠皮膚、肺臟的病理變化，計(jì)算皮膚、肺臟炎癥評(píng)分及纖維化評(píng)分，免疫組化法檢測(cè)小鼠皮膚和肺組織IL-17A細(xì)胞因子的表達(dá)，熒光定量PCR(RT-PCR)檢測(cè)小鼠皮膚及肺臟IL-17A、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)-β1、Ⅰ型膠原mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1、抗體組小鼠皮膚厚度(61.08±5.68μm)、皮膚炎癥評(píng)分(2.47±0.15)

3、明顯低于模型組(84.43±6.19μm、2.83±0.24)及同型對(duì)照組(83.21±5.72μ m、2.85±0.19)(P＜0.05)。
　　2、抗體組小鼠肺臟纖維化、炎癥評(píng)分(2.53±0.18、1.87±0.12)低于模型組(3.07±0.24、2.83±0.24)及同型對(duì)照組(3.03±0.29、2.28±0.16)（P＜0.05）。
　　3、免疫組化測(cè)定小鼠皮膚IL-17A細(xì)胞因子的表達(dá)，抗體組的積分光密度(I

4、OD)值(4.74±1.50)高于正常對(duì)照組(1.32±0.85)而低于模型組(9.95±3.06)和同型對(duì)照組(10.02±2.00)(P＜0.05)。
　　4、免疫組化測(cè)定小鼠肺臟IL-17A細(xì)胞因子的表達(dá)，抗體組的IOD值(36.64±9.45)高于正常對(duì)照組(17.77±9.76)而低于模型組(59.53±15.40)和同型對(duì)照組(61.46±16.91)(P＜0.05)。
　　5、抗體組小鼠皮膚中IL-17A(3.

5、00±1.20)、TGF-β1(3.20±1.27)、Ⅰ型膠原(3.30±0.88)mRNA的表達(dá)量低于模型組(6.00±2.19、5.73±2.29、5.70±2.25)和同型對(duì)照組(5.98±2.50、5.25±1.75、5.27±2.12)(P＜0.05)。
　　6、抗體組小鼠肺臟中IL-17A(1.57±0.39)、TGF-β1(1.83±0.75)、Ⅰ型膠原(1.50±0.58) mRNA的表達(dá)量低于模型組(2.44±0

6、.55、3.04±0.84、2.40±0.73)和同型對(duì)照組(2.43±1.09、2.91±1.0、2.32±0.85)(P＜0.05)。
　　7、免疫組化檢測(cè)小鼠皮膚IL-17A細(xì)胞因子的表達(dá)量與皮膚炎癥評(píng)分、皮膚厚度、皮膚TGF-β1、Ⅰ型膠原mRNA的表達(dá)量密切正相關(guān)。
　　8、免疫組化檢測(cè)小鼠肺組織IL-17A細(xì)胞因子的表達(dá)量與肺部炎癥、纖維化評(píng)分、肺組織的TGF-β1、Ⅰ型膠原mRNA的表達(dá)量密切正相關(guān)。
　

7、　結(jié)論:
　　1、IL-17A在SSc小鼠模型皮膚和肺組織中表達(dá)增高，IL-17A水平與SSc炎癥和纖維化程度呈正相關(guān)。
　　2、IL-17A與TGF-β1可能共同作用參與了SSc的發(fā)病，阻斷IL-17A可抑制TGF-β1、Ⅰ型膠原mRNA的表達(dá)，從而減少SSc的炎癥及纖維化病變。
　　第二部分體外IL-17A對(duì)系統(tǒng)性硬化病小鼠模型肺成纖維細(xì)胞分泌功能的影響
　　目的:
　　觀察IL-17A及其單克隆抗體對(duì)

8、SSc小鼠模型肺成纖維細(xì)胞(FB)分泌功能的影響，進(jìn)一步探討IL-17A在SSc纖維化形成中的作用。
　　方法:
　　選用SSc小鼠模型肺組織進(jìn)行原代培養(yǎng)FB，通過倒置顯微鏡觀察形態(tài)，將培養(yǎng)的FB分為3組:對(duì)照組(FB+DMEM培養(yǎng)基)、刺激組(FB+IL-17A)、阻斷組（FB+抗IL-17A單克隆抗體），培養(yǎng)48小時(shí)，用RT-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞Ⅰ型膠原、TGF-β1mRNA的表達(dá)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)培養(yǎng)

9、液上清IL-6、TGF-β1的水平。
　　結(jié)果:
　　1、培養(yǎng)的肺組織塊緊密貼壁，倒置顯微鏡下觀察組織塊為暗黑色遮光區(qū)域，4-6天可見周圍有以梭形細(xì)胞游出，逐漸密集，11-20天細(xì)胞可傳代。
　　2、阻斷組細(xì)胞TGF-β1(18.73±5.52)、Ⅰ型膠原(342.66±78.39)mRNA表達(dá)量低于刺激組(57.17±12.40、556.52±116.04)(P＜0.05)，而高于對(duì)照組(3.53±0.94、216.

10、49±18.33)(P＜0.05)。
　　3、阻斷組細(xì)胞培養(yǎng)上清液IL-6和TGF-β1的水平(3009.13±198.76pg/ml、292.56±54.20pg/ml)低于刺激組(3812.54±92.03pg/ml、527.38±41.00pg/ml)(P＜0.05)，而高于對(duì)照組(2561.28±283.70pg/ml、217.05±55.08pg/ml)(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、IL-17A可促