HPV E6-E7 mRNA和HPV L1蛋白檢測在診斷宮頸病變中的臨床評(píng)價(jià).pdf

1、目的：
　　本研究采用分支鏈DNA技術(shù)(b-DNA)和免疫組織化學(xué)方法來分別檢測HPV陽性病人E6/E7 mRNA和HPV L1蛋白表達(dá)，探討不同級(jí)別上皮內(nèi)病變與HPV E6/E7 mRNA及HPV L1蛋白表達(dá)的關(guān)系，并評(píng)估這兩種方法在診斷宮頸上皮內(nèi)病變中的臨床價(jià)值，以期尋找最佳的宮頸病變檢測指標(biāo)，為臨床分流HPV陽性病人，監(jiān)測宮頸病變進(jìn)展、復(fù)發(fā)等提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1.收取2014年2月至2015年10

2、月在河南省直第三人民醫(yī)院行宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查(thinprep cytologic test，TCT)的標(biāo)本，采用第二代雜交捕獲(hybridcaptureⅡ，HC2)法檢測其高危型人乳頭瘤狀病毒DNA，并追蹤其組織病理結(jié)果。選取其中HPV陽性且具有組織學(xué)診斷結(jié)果的患者127例，年齡16-77歲，(37.23±16.39)。其中24例細(xì)胞學(xué)檢測為未見上皮內(nèi)病變細(xì)胞或惡性細(xì)胞(Negative forIntraepithelial L

3、esion or Malignancy,NILM)且組織學(xué)診斷正?；蚵匝装Y者設(shè)為對(duì)照組，收集其剩余TCT標(biāo)本和宮頸組織石蠟標(biāo)本，分別進(jìn)行HPV E6/E7 mRNA和HPV L1蛋白檢測。
　　2.處理剩余TCT標(biāo)本，采用分支鏈DNA技術(shù)(b-DNA)檢測標(biāo)本中HPVE6/E7 mRNA水平。
　　3.采用免疫組織化學(xué)技術(shù)，檢測宮頸組織石蠟標(biāo)本中人乳頭瘤狀病毒L1蛋白表達(dá)水平。
　　4.使用SPSS17.0軟件來進(jìn)行

4、數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。HPV E6/E7 mRNA和HPV L1蛋白表達(dá)水平與宮頸病變嚴(yán)重程度間關(guān)系采用關(guān)聯(lián)分析;E6/E7 mRNA和HPVL1蛋白陽性率間比較采用McNemar檢驗(yàn)，不同病變級(jí)別組間比較采用x2檢驗(yàn);不同檢驗(yàn)方法間敏感性、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值比較采用x2檢驗(yàn)。兩種檢測方法間一致性評(píng)估采用Kappa統(tǒng)計(jì)分析。α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　結(jié)果：
　　1.在不同組織學(xué)分組對(duì)照組、CIN1、CIN2、CIN3

5、和鱗狀細(xì)胞癌(SquamousCells Cancer,SCC)組中HPV E6/E7 mRNA的陽性率分別為37.5％、53.6％、85.2％、94.1％、100.0％。HPV L1蛋白的陽性率分別為16.7％、60.7％、29.6％、11.8％、0％，HPV E6/E7 mRNA和HPV L1蛋白表達(dá)水平均與組織學(xué)診斷級(jí)別間有一定聯(lián)系（x2分別為35.801和27.320，均P＜0.001），關(guān)聯(lián)系數(shù)r分別為0.469和0.421(

6、均P＜0.001)。CIN1-（包括對(duì)照和CIN1）組HPV E6/E7 mRNA陽性率明顯低于CIN2+組（包括CIN2、CIN3和SCC，x2=32.924，P＜0.001），而CIN1-組HPV L1蛋白陽性率高于CIN2+組（x2=9.494，P＜0.05）。
　　2.對(duì)應(yīng)不同細(xì)胞學(xué)診斷級(jí)別NILM、ASCUS、LSIL、ASC-H/LSIL-H、AGC、HSIL和SCC中E6/E7 mRNA陽性率分別為37.5％、63.

7、3％、68.8％、84.6％、100％、96.6％、100.0％; HPV L1蛋白表達(dá)的陽性率分別為16.7％、43.3％、68.8％、15.4％、14.3％、6.9％、0％。分析HPV E6/E7 mRNA和HPV L1蛋白的表達(dá)趨勢，發(fā)現(xiàn)二者均與細(xì)胞學(xué)診斷級(jí)別間有一定聯(lián)系（x2分別為31.680和30.553，均P＜0.001），關(guān)聯(lián)系數(shù)分別為（r=0.447和0.440，均P＜0.001）。LSIL-組（包括NILM，ASCUS

8、和LSIL）E6/E7 mRNA陽性率明顯低于ASC-H+組（包括ASC-H，LSIL-H，AGC，HSIL和SCC，x2=24.403，P＜0.001），而LSIL-組HPV L1蛋白陽性率明顯高于ASC-H+組(x2=15.930，P＜0.001)。
　　3.HPV E6/E7 mRNA陽性率(73.2％)明顯高于HPV L1蛋白陽性率(26.0％，x2=42.451，P＜0.001)，兩種檢測方法的符合率為64.57％(82

9、/127)，因而E6/E7mRNA和HPV L1蛋白表達(dá)水平間沒有聯(lián)系(x2=0.979，P＞0.05)。
　　4.以組織學(xué)為金標(biāo)準(zhǔn)，E6/E7 mRNA分別與HPV L1蛋白檢測及兩者聯(lián)合檢測方法間敏感性和陰性預(yù)測值比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(x2分別為2.988和4.474，均P＞0.05);但兩者聯(lián)合檢測方法特異性高于E6/E7 mRNA檢測方法(x2=7.278，P＜0.016)，且其陽性預(yù)測值高于HPV L1蛋白方法(x2=6.