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1、丙型肝炎病毒(HCV)病毒體呈球形,為單股正鏈RNA病毒,HCV感染可發(fā)展為慢性肝炎,肝硬化甚至肝癌。目前針對(duì)HCV感染尚無(wú)有效的保護(hù)性疫苗,并且針對(duì)HCV感染的治療手段仍然有限。以往的報(bào)道證實(shí)許多宿主因子可能涉及丙型肝炎的發(fā)病機(jī)理,例如:La抗原,多聚胞嘧啶結(jié)合蛋白2(PCBP2)等。
高遷移率族蛋白1(HMGB1)作為高遷移率族蛋白家族的成員之一,是一種非組蛋白核蛋白。HMGB1由兩個(gè)同源DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域和一個(gè)高度帶負(fù)電荷
2、的羧基端結(jié)構(gòu)域組成,有報(bào)道表明HMGB1可以結(jié)合DNA,也可結(jié)合雙鏈RNA和免疫性RNA作為核酸介導(dǎo)的先天性免疫反應(yīng)廣泛傳感器。盡管在最近報(bào)道稱由病毒感染的細(xì)胞釋放出來(lái)的HMGB1可阻止HCV感染,但細(xì)胞內(nèi)的HMGB1在HCV復(fù)制和(或)翻譯中所起的作用并不知道。
在本課題中,我們研究了高速遷移族蛋白1對(duì)HCV復(fù)制和翻譯的影響。我們發(fā)現(xiàn)在HCV感染的細(xì)胞中,過(guò)表達(dá)HMGB1時(shí),HCV的RNA水平和蛋白水平隨之顯著性的升高;敲除
3、HMGB1時(shí),HCV的RNA水平和蛋白水平也隨之顯著性的降低。隨后,我們運(yùn)用HCV雙順?lè)醋淤|(zhì)粒系統(tǒng)(pRL-HL)和HCV IRES RNA報(bào)告系統(tǒng)探討HMGB1對(duì)HCV翻譯的影響,結(jié)果表明HMGB1不作用于HCV的翻譯過(guò)程。免疫熒光結(jié)果顯示HCV感染的肝細(xì)胞中HMGB1由胞核轉(zhuǎn)移至胞質(zhì),通過(guò)免疫沉淀和RNA結(jié)合蛋白免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí),HMGB1與HCV正鏈RNA結(jié)合。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)表明:HMGB1是通過(guò)A box結(jié)構(gòu)域與HCV5'UTR
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