高遷移率族蛋白1在小鼠狼瘡性腎炎中的表達.pdf

1、研究背景和目的: 系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus,SLE)是一種累及人體各個器官的自身免疫性疾病,而腎臟是SLE最容易受累的器官.狼瘡性腎炎已經(jīng)成為SLE患者致死致殘的主要原因.在眾多導致狼瘡性腎炎發(fā)生和發(fā)展的因素中,細胞因子是最重要的因素之一.研究表明,大量細胞因子參與了狼瘡性腎炎的免疫炎癥反應,致炎細胞因子和抗炎細胞因子之間失衡的程度決定了炎癥的嚴重性和范圍.高遷移率族蛋白-1(hi

2、gh mobility group box chromosomal proteinl,HMGB-1)是一種參與細胞核內(nèi)多種生物學功能的核內(nèi)蛋白,最新的研究發(fā)現(xiàn)它是一種新型的炎性細胞因子.HMGB-1能夠激活和趨化炎癥細胞,誘導大量細胞因子的分泌.同時,HMGB-1是一種內(nèi)源性的免疫輔劑,是樹突狀細胞的成熟過程和Th1細胞的極化過程中的一個調(diào)節(jié)因子,對于維持Th1和Th2細胞因子之間的平衡有著重要作用.以往的研究已經(jīng)證實,新型細胞因子HM

3、GB-1和多種自身免疫性疾病相關,并成為關節(jié)炎治療的靶向.本實驗旨在明確HMGB-1是否也參與了小鼠狼瘡性腎炎的發(fā)生和發(fā)展. 實驗材料和方法: 實驗動物為清潔級雌性MRL/lpr轉基因小鼠和年齡匹配的雌性C57BL/6J近交系小鼠.分別在6周齡、12周齡和20周齡時將小鼠麻醉后留取血清和腎臟組織標本,進行以下實驗: 1、對腎組織進行常規(guī)HE染色、PAS染色、Masson三色染色,免疫病理檢查(IgG+IgM和補體

4、C3)和超微結構檢查,以評價小鼠腎臟病理學損害程度. 2、用酶聯(lián)免疫吸附劑測定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法檢測鼠血清抗雙鏈DNA(dsDNA)抗體滴度. 3、用逆轉錄-聚合酶鏈反應(Reverse transcription-Polymerase chain reactions,RT-PCR)法檢測小鼠腎臟HMGB-1、單核細胞趨化因子-1(MCP-1)和白介素-

5、1β(IL-1 β)mRNA表達水平.4、用間接免疫熒光法對HMGB-1在小鼠腎臟中的表達進行定位. 實驗結果: 1、MRL/lpr小鼠血清抗dsDNA抗體的滴度隨著年齡的增加而上升,明顯高于同齡C57BL/6J小鼠. 2、隨著年齡的增加,MRL/lpr小鼠腎臟的組織病理損害加重,主要表現(xiàn)為急性和亞急性增生性腎小球腎炎.6周齡MRL/lpr小鼠未出現(xiàn)腎臟損害.12周齡出現(xiàn)少量蛋白管型,腎小球系膜細胞和內(nèi)皮細胞中

6、度增生,間質炎癥細胞浸潤;20周齡出現(xiàn)大量蛋白管型和重度系膜細胞和內(nèi)皮細胞增生,并形成新月體.而在任何年齡段的C57BL/6J小鼠中,均未發(fā)現(xiàn)其腎臟組織出現(xiàn)明顯病理學改變. 3、MRL/lpr小鼠腎臟中HMGB-1 mRNA的表達(0.853±0.110)明顯高于同齡C57BL/6J小鼠(0.731±0.103)(P<0.05),和MCP-1 mRNA的表達量成正相關(r=0.584,P<0.05). 4、MRL/lpr

7、 小鼠的腎臟中HMGB-1蛋白熒光標記呈強陽性,尤其在細胞增生明顯而肥大的腎小球呈高表達;而在C57BL/6J小鼠腎臟組織中以小管表達為主,腎小球僅小部分呈微弱表達.HMGB1蛋白主要位于細胞的細胞漿和細胞外. 5、IL-1 β mRNA在已出現(xiàn)腎臟損害的MRL/lpr小鼠腎組織中表達低于同周齡C57BL/6J小鼠. 結論: 本實驗首次揭示了新型細胞因子HMGB-1在MRL/lpr小鼠腎臟中的異常升高且分布不同