大鼠溺死內(nèi)參基因篩選和水通道蛋白5的表達(dá).pdf

1、目的：探討溺死大鼠死后不同時(shí)間點(diǎn)mRNA的變化及穩(wěn)定性，篩選穩(wěn)定的內(nèi)參基因，并定量水通道蛋白5（Aquaporin，AQP-5）mRNA的表達(dá)。
　　方法：選取30只無特定病原體（Specific pathogen Free，SPF）級健康成年SD（Sprague Dawley）大鼠，并按照隨機(jī)單位組設(shè)計(jì)分組法，以每組6只，隨機(jī)均勻分為對照組（脊椎脫臼法處死）、溺死15min組（溺死尸體置于水中15min），溺死4h組（溺死尸體置

2、于水中4h），溺死16h組（溺死尸體置于水中16h），溺死48h組（溺死尸體置于水中48h）。取溺死尸體及對照組尸體解剖，觀察肺臟變化，并分取肺組織，一部分用4％多聚甲醛（polyformaldehyde，PFA）中性PBS（phosphate buffer saline）液固定，用于形態(tài)學(xué)檢測；一部分液氮速凍，提取RNA，采用qPCR（Real Time PCR，實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)）篩選穩(wěn)定的內(nèi)參基因以及對AQP-5進(jìn)行定量檢測

3、。
　　結(jié)果：與對照組比較，各溺死組大鼠肺部均呈嚴(yán)重水腫，一定程度破裂出血，并可感覺到明顯溺液存于肺臟。通過提取RNA，并行qPCR， geNorm和NormFinder排序篩選發(fā)現(xiàn)ACTB（β-Actin，β-肌動(dòng)蛋白）為最穩(wěn)定的內(nèi)參基因；檢測AQP-5的表達(dá)我們發(fā)現(xiàn)溺死大鼠較對照組大鼠AQP-5相對表達(dá)量下降。
　　結(jié)論：篩選出 ACTB為最穩(wěn)定的內(nèi)參基因，各溺死時(shí)間點(diǎn)大鼠AQP-5 mRNA的表達(dá)均顯著下調(diào)。本研究中A