甲醇利用菌MB200絲氨酸乙醛酸氨基轉(zhuǎn)移酶基因（sga）的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、sga基因是大多數(shù)Methylobacteriumsp.中絲氨酸循環(huán)途徑里的一個關鍵酶基因，與單碳化合物的同化及二碳化合物的代謝有著密切的關系。根據(jù)已報道的MethylobacteriumextorquensAM1的sga基因序列，合成寡核苷酸引物，用本實驗室保存的甲醇利用菌M.sp.MB200的染色體DNA為模板，通過PCR方法擴增出sga基因，測序分析表明該片段與AM1的sga基因在核苷酸水平有95﹪的同源性，氨基酸水平具有85﹪的

2、同源性。但在核苷酸序列的第48bp處比AM1的sga序列多出54個bp的堿基，氨基酸的序列數(shù)也在該位置有相應的增加。 利用自殺質(zhì)粒pK18mob構建含有部分sga基因片段的重組質(zhì)粒，選擇正向連接的重組質(zhì)粒，通過三親本結合后導入野生菌株MB200中，經(jīng)過進一步同源單交換，MB200體內(nèi)sga基因被pK18mob插入突變，利用PCR方法和Southern雜交對突變菌株MB200sTB進行驗證。利用載體pLAFRJ構建含有完整sga

3、基因的重組質(zhì)粒，通過三親本結合方法分別導入突變株MB200sTB和野生菌株MB200中，分別得到MB200sHB和MB200sga。利用酶切和PCR方法對MB200sHB和MB200sga進行驗證。 分析結果表明MB200sTB的絲氨酸乙醛酸氨基轉(zhuǎn)移酶(SGAT)的酶活性消失，同時失去了在以甲醇為唯一碳源的培養(yǎng)基上生長的能力，但仍能在以二碳化合物和多碳化合物為唯一碳源的培養(yǎng)基上生長。MB200sHB恢復了利用甲醇為唯一碳源的生

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